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重组慢病毒质粒和包装质粒(慢病毒包装的载体和普通质粒的区别)

重组慢病毒质粒和包装质粒(慢病毒包装的载体和普通质粒的区别)

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  1. 包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...

1、包装反转录病毒(如慢病毒)时采用多质粒系统共转染细胞,那么包转好的...

就以慢病毒为例。包装好的病毒只含有结构质粒5;LTR和3;LTR之间的RNA序列。多质粒系统指的是慢病毒的包装系统,就三质粒(包装质粒、包膜蛋白质粒、转移质粒)包装系统来说,病毒包装必需的3个蛋白Gag/Pol、Rev、VSV-G分别放置在不同的质粒上,且互相之间没有任何同源序列,就是为了不使其进行重组。

无需任何转染试剂,操作简便。5) 可以根据客户需要制备多种标记。慢病毒包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3) 培养 48hrs – 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。4) 病毒的纯化和浓缩。

病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增,也只能在293A里扩增,其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的,野生型的慢病毒载体是可以复制的,但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。

在程序上,慢病毒和逆转录病毒载体的一个重要区别在于:对慢病毒载体,通常包装、包膜和转运质粒共转染入包装细胞系,而对逆转录病毒载体,只有转运载体才转染到细胞系内,而细胞系早已稳定表达另外两种载体.包膜蛋白 病毒载体可以借助其他病原体的外壳蛋白包装成假病毒,以改变其嗜性。

慢病毒包装简要流程:1)含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3)培养48hrs-72hrs左右,收集含有病毒的上清培养液。4)病毒的纯化和浓缩。5)分装、-80℃保存。6)滴度测定目的基因鉴定。

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