阳性菌裂解液代谢组学-裂解细菌的试剂
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1、细菌DNA提取各步骤和目的,能详细的教一下吗
因此使质粒DNA与染色体 DNA分离开。②细菌中的RNA可以通过RNaseA去除 ③蛋白质的去除 :细菌中的蛋白质可以通过酚/氯仿/异戊醇抽提,酚可以使蛋白质变性,氯仿将微溶 于水的酚抽提到有机相中,使其与水相中的DNA分离。
第一,时间不能过长,千万不要这时候去接电话,因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂;第二,必须温柔混合,不然基因组DNA也会断裂。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。细胞的破碎 细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。
原理很简单,首先通过离心的方法获得细菌沉淀,然后使用缓冲液重悬细菌,再加入裂解液将菌体裂解,然后加入RNA酶和蛋白酶,来降解里面的RNA以及蛋白质,随后再使用柱回收的方法,将基因组DNA纯化。
而质粒DNA双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解状态存在于液相中。在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中,除了超螺旋DNA外,还会产生其它形式的质粒DNA。
2、请教:细菌DNA的提取
苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次,氯仿抽提一次后,乙醇沉淀DNA,用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中,70%乙醇洗2次,干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中。
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。
刮取1~2接种环菌苔加入150微升三蒸水中,混匀,100摄氏度煮沸10分钟。12000转/分钟离心10分钟,取上清,-20摄氏度保存备用。操作最简便,对试剂条件要求低。缺点是纯度不够高,可能会含有RNA、蛋白等杂质。
M NaCl沉淀一下蛋白(DNA在此浓度溶解度增加,而蛋白减小)。或者用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)PH8抽提,去蛋白。其后依旧用异丙醇沉淀,70%乙醇洗。CTAB/NaCl功能与SDS相当,但一般用于提取植物基因组。
dna的提取方法:浓盐法、SDS法、CTAB法等。 浓盐法。根据DNA和RNA在电解溶液中的溶解度不同,可将二者分离。
3、细菌外毒素主要由___产生,内毒素主要由___产生。
内毒素是革兰氏阴性菌,(如伤寒杆菌,结核杆菌,痢疾杆菌等)的菌体中存在的毒性物质的总称。是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分,由菌体裂解后释出的毒素,又称之为“热原”。单位Eu/ml。
【答案】:外毒素来源G 菌及部分G-菌分泌或溶解后释放出;化学成分是蛋白质;稳定性:60~80℃30分钟被破坏;免疫原性:强,易刺激机体产生抗毒素。
外毒素。外毒素由两部分组成,是由两个蛋白质亚基构成的。有毒性的部分为A,是一种酶;与细胞结合的部分叫B,B使外毒素结合到寄主细胞的特定组分上,这个组分多半是酶。2)内毒素。
外毒素是细菌在某些代谢过程中产生并分泌到菌体外的毒性物质。主要由革兰阳性菌产生,少数革兰阴性菌也能产生。
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