代谢组学一般套路(代谢组学视频教程)
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1、代谢组学究竟是一门什么样的研究方向?
“代谢组学”是一种整体性的研究策略,其研究策略有点类似于通过分析发动机的尾气成分,来研究发动机的运行规律和故障诊断等的“反向工程学”的技术思路。
概述代谢组学是效仿基因组学和蛋白质组学的研究思想,对生物体内所有代谢物进行定量分析,并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式,是系统生物学的组成部分。
代谢组学是研究生物体内所有代谢物的科学,它在植物研究中有着广泛的应用。
“靶向代谢组学”的研究对象是确定的一种或几种代谢产物,并用大量的试验样本进行验证,由于要进行定量研究,有可能会使用内标来制定标准曲线(绝对定量)。
2、代谢组学细胞样本收集
代谢组学方法已广泛用于动物和植物组织、酵母和细菌,针对不同的组织和细胞类型开发了不同的样品收集技术。
离心:将血液样本在4°C下进行离心(例如,3000 g,10分钟),以分离血浆或血清。血浆:抽血后,立即在4°C下离心(例如,3000 g,10分钟)以分离血浆。血浆位于管子顶部,应小心转移以避免扰动红细胞。
代谢组学的研究方法:代谢组学研究一般包括代谢组数据的采集、数据预处理、多变量数据分析、标记物识别和途径分析等步骤。生物样品(如尿液、血液、组织、细胞和培养液等)采集后进行生物反应灭活、预处理。
收集细胞没收集完全细胞会导致细胞破碎从而影响代谢组学分析过程。细胞不同于其他的样本,它的代谢物丰富但含量较低且不易收集或收集不完全,因此需要一种有效可靠的处理方法来获得更为全面的代谢物信息。
即 重要程度 ; 一般我们使用第第二主成分的VIP来表示这个m/z对模型分型的贡献程度, VIP=1被认为是具有显著贡献的 。
3、【代谢组学】3.数据分析
代谢物提取,一般要求每组至少10个样; 在所有提取好的样本中取等量混合作为QC; QC样本与实验样本穿插上机,开始十个QC,结尾三个QC,中间每十个样本穿插一个QC样本 。
这里我们采用基于秩的检验方法,其中基因集富集分析(GSEA)是在转录组数据背景下进行代谢路径分析的一个常见例子,它也可以应用于代谢组数据。
在中心法则的指导下,基因组、转录组、蛋白组通常以 信息流 的方式呈现,而代谢组被认为是新陈代谢的结果。
本部分分析内容与常规代谢组学一致,主要针对代谢物含量开展单维与多维统计学分析、KEGG通路分析、表达量相关性分析、聚类热图、代谢物分类等分析。
代谢组学分析如下:代谢组学研究可分为两类:“发现代谢组学”(也称“非靶向代谢组学”)和“靶向代谢组学”。
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