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蛋白质组学需要多少细胞量,蛋白质组学课程

蛋白质组学需要多少细胞量,蛋白质组学课程

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  1. 代谢组学细胞样本收集
  2. 培养皿的细胞蛋白量
  3. 2. 蛋白质组学样品前处理(2)

1、代谢组学细胞样本收集

代谢组学方法已广泛用于动物和植物组织、酵母和细菌,针对不同的组织和细胞类型开发了不同的样品收集技术。

离心:将血液样本在4°C下进行离心(例如,3000 g,10分钟),以分离血浆或血清。血浆:抽血后,立即在4°C下离心(例如,3000 g,10分钟)以分离血浆。血浆位于管子顶部,应小心转移以避免扰动红细胞。

代谢组学的研究方法:代谢组学研究一般包括代谢组数据的采集、数据预处理、多变量数据分析、标记物识别和途径分析等步骤。生物样品(如尿液、血液、组织、细胞和培养液等)采集后进行生物反应灭活、预处理。

收集细胞没收集完全细胞会导致细胞破碎从而影响代谢组学分析过程。细胞不同于其他的样本,它的代谢物丰富但含量较低且不易收集或收集不完全,因此需要一种有效可靠的处理方法来获得更为全面的代谢物信息。

2、培养皿的细胞蛋白量

是细胞分泌的蛋白的话,直接在培养皿中铺入一定量的细胞,培养3天,细胞达到80-90%时,加药的时候换无血清培养基,作用完后收集细胞培养上清液,3000rpm,4℃ 离心10min,取上清液。

比如:35mm玻璃底培养皿,细胞生长面积是5cm2,包被面积是1cm2,包被液体积是400μl,那根据推荐用量2μg/cm2。

细胞膜的化学组成基本相同,主要由脂类、蛋白质和糖类组成。各成分含量分别约为50%、42%、2%~8%。此外,细胞膜中还含有少量水分、无机盐与金属离子等。

培养基中含有的蛋白质、氨基酸和其他生物分子可能对某些蛋白质定量方法产生干扰,例如Bradford、Lowry 和 BCA 蛋白测定法。

3、2. 蛋白质组学样品前处理(2)

第二步: 蛋白裂解,因为蛋白被福尔马林或甲醇固定得非常紧了,有的人会选择加入水,让样品泡涨,我们更推荐加入裂解液(0.1M Tris-HCI, pH 0, 0.1M DTT),充分水化被固定的蛋白样品,然后匀浆和超声。 第三步: 水化之后,加入4%SDS。

用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。选择性变性沉淀法 (1)例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶,可以通过加热进行热处理,使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。

蛋白质组学研究的主要步骤如下:蛋白质样品的制备:蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节,也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。

样品处理的一致性:在整个实验过程中,应该尽量保持样品处理的一致性,以避免引入人为误差。使用相同的方法和条件来处理不同的样品,包括对照组和实验组。样品保存:蛋白质样品在采集后应立即处理或冷藏保存。

总体来说,蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。有机溶剂的选择首先是能和水混溶,使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮,还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。

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