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蛋白质组学植物样本处理(蛋白质组学样品制备)

蛋白质组学植物样本处理(蛋白质组学样品制备)

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  1. 2. 蛋白质组学样品前处理(2)
  2. 蛋白质组学中三次生物学重复只有一次鉴定到的蛋白要怎么处理
  3. 植物组织蛋白质提取用什么方法?

1、2. 蛋白质组学样品前处理(2)

第二步: 蛋白裂解,因为蛋白被福尔马林或甲醇固定得非常紧了,有的人会选择加入水,让样品泡涨,我们更推荐加入裂解液(0.1M Tris-HCI, pH 0, 0.1M DTT),充分水化被固定的蛋白样品,然后匀浆和超声。 第三步: 水化之后,加入4%SDS。

用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。选择性变性沉淀法 (1)例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶,可以通过加热进行热处理,使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。

蛋白质组学研究的主要步骤如下:蛋白质样品的制备:蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节,也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。

样品处理的一致性:在整个实验过程中,应该尽量保持样品处理的一致性,以避免引入人为误差。使用相同的方法和条件来处理不同的样品,包括对照组和实验组。样品保存:蛋白质样品在采集后应立即处理或冷藏保存。

2、蛋白质组学中三次生物学重复只有一次鉴定到的蛋白要怎么处理

所得沉淀物用一生中适当的缓冲溶液进行洗涤,洗去可能存在的杂质;用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。

四次重复实验检测发现,用这种装置做下来,四次都能被重复的蛋白有99%,只有6%的蛋白是其中任意一次单独鉴定到的,5%是其中两次鉴定到的,0%是其中三次鉴定到的。

此方法可分为:1)利用表面活性剂(三氯乙酸)或有机溶剂引起变性;2)利用对热的不稳定性,加热破坏某些组分,而保存另一些组分;3)酸碱变性。

目前都以3次生物学重复实验设计为主,要求严格的实验可以做5次重复。技术重复:指对同一样本进行重复地检测分析,例如同一份细胞中抽提的蛋白质进行三次质谱检测,或者对同一RNA-seq样本测序3次。

3、植物组织蛋白质提取用什么方法?

植物蛋白质的提取方法基本上有这几种:盐析法、有机溶剂法和等电点法。盐析法 原理:盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐,使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出,而与其他成分分离的方法。

植物组织蛋白质提取方法 三氯醋酸—丙酮沉淀法 在液氮中研磨叶片 加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

植物组织蛋白质提取方法(summer)根据样品重量(1g样品加入5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。

植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸-丙酮沉淀法 在液氮中研磨叶片 加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。

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