蛋白质组学液相分析原理-蛋白质液相层析

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液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱（LLC）及液-固色谱（LSC）。

气相色谱仪原理：利用色谱柱先将混合物分离，然后利用检测器依次检测已分离出来的组分。应用范围：环境保护：大气水源等污染地的痕量毒物分析、监测和研究。生物化学：临床应用，病理和毒理研究。

原理高效液相色谱法仪根据各种各样的相互作用力来分离混合物。这种相互作用力通常是分析物及分析管柱之间的一种非共价性质。

液相色谱仪有以下几个领域的应用：环境分析中的应用：可应用于环芳烃、农药残留分析等。食品分析中的应用》可应用于食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析等。

所以色谱分离的原理就是利用待分离物质与固定相（比如上例中的碳酸钙柱子）和流动相（比如用来冲洗色素的石油醚）之间相互作用的差异来实现分离。

蛋白质谱技术简单来说就是一种将质谱仪用于研究蛋白质的技术。

用以将色谱流出物导入质谱，经离子化后供质谱分析。主要技术包括各种喷雾技术（电喷雾，热喷雾和离子喷雾）；传送装置（粒子束）和粒子诱导解吸（快原子轰击）等。

质谱分析的原理：使试样中各组分电离生成不同荷质比的离子，经加速电场的作用，形成离子束，进入质量分析器。

目前，亲水作用液相层析（hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC）正被广泛应用于蛋白质的研究和制备领域，是新型的分离纯化以及分析生物大分子尤其是蛋白质的有力工具。

疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。

根据各种蛋白质在不同物理化学因子作用下稳定性不同的特点，用适当的选择性沉淀法，即可使杂蛋白变性沉淀，而欲分离的有效成分则存在于溶液中，从而达到纯化有效成分的目的。

帮助解析蛋白质网络和信号传导通路。这些高通量鉴定蛋白质的技术在功能基因组学研究、药物开发和临床诊断等领域具有重要的应用价值。根据不同的研究目的和问题，可以选择适合的技术或结合多种技术进行蛋白质分析。

气相色谱利用物质在固定相和流动相之间的分配平衡原理进行分离。在GC中，固定相通常是涂层在固体载体上的液体或聚合物，而流动相是气体。

分离原理：气相：气相色谱是一种物理的分离方法。

这种组分迁移速度的差异最终导致分离。当固定相为吸附剂时，则是利用吸附粉体对分离组分的吸附作用分离组分。高效液相分离法是具有高分离效能的柱液相色谱法。原理同上，只是塔板数增加很多，比一般液相色谱高2到3个数量级。

气相色谱定量分析原理气相色谱法是一种分离分析方法。

蛋白质组学三大基本技术有：质谱技术、SDS-PAGE 技术、免疫淋巴细胞技术。

质谱技术MS：是目前分析蛋白质的主要手段之一。质谱技术可以检测蛋白质的质量、序列、修饰和定量等信息，包括基于母离子扫描MS和tandem MS（MS/MS）等多种方法。

蛋白质组学研究的基础技术主要包括以下两个方面：二维电泳（2-DE）：二维电泳是一个用于分离蛋白质的技术，其中第一维度是按照蛋白质的等电点分离，而第二维度是按照蛋白质的分子量分离。

蛋白质鉴定：可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术，利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。翻译后修饰：很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化，糖基化，酶原激活等。

蛋白质组学技术的发展已经成为现代生物技术快速发展的重要支撑，并将引领生物技术取得关键性的突破。

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