蛋白质组学双向电泳技术-蛋白质双向电泳的基本原理
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1、蛋白质组的技术原理
蛋白质芯片技术:将具有特定功能的蛋白质固定在芯片上,与样品中的蛋白质发生特异性结合。可以用于高通量筛选蛋白质-蛋白质相互作用、抗体检测等应用。
从广义上来说,蛋白质工程是通过物理、化学、生物和基因重组等技术改造蛋白质或设计合成具有特定功能的新蛋白质。
蛋白质工程的原理,就是指在进行相关操作时遵循的基本原理。
表 面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance,SPR)已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。
2、蛋白质组学研究的主要步骤
在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织,如肿瘤组织与癌旁正常组织,然后裂解组织和细胞,抑制蛋白酶活性,出去非蛋白质的DNA,RNA,脂类等物质,溶解蛋白质,溶解并抽提总蛋白质。
蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面:蛋白质标本的制备及分离:寻找较好的方法尽可能完全地抽提细胞或组织中的全部蛋白质是比较蛋白质组学研究的重要前提。
蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。
蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面。
3、双向电泳名词解释
d电泳名词解释:2D电泳,也称为双向电泳,是一种凝胶电泳技术,通常用于分析蛋白质。
不是。双向电泳一般是蛋白质组用的,第一向等电聚焦,第二向SDS-PAGE。对角线电泳是测定肽链中二硫键位置用的。两向条件相同,所以肽段都在对角线上。不过中间用过甲酸处理了,所以原来有二硫键的肽段会偏离。
等电聚胶电泳(IFE):利用一种特殊的缓冲液(两性电解质)在聚丙烯酰氨凝胶制造一个pH梯度,电泳时,每种蛋白质迁移到它的等电点(pI)处,即梯度足的某一pH时,就不再带有净的正或负电荷了。
名词解释:蛋白质等电点 在某一pH的溶液中,氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,成为兼性离子,呈电中性,此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。
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