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蛋白质组学定量方法及实验流程ppt(蛋白质组学设计实验)

蛋白质组学定量方法及实验流程ppt(蛋白质组学设计实验)

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  1. 蛋白质的定量测定方法
  2. 蛋白质的定量方法有哪几种?
  3. 蛋白质组学研究的主要步骤
  4. 测定蛋白质的定量的方法有哪些及其原理各是什么

1、蛋白质的定量测定方法

试剂:a、标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。

蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。

吸光度法(Absorbance Method):这是一种最常用的蛋白质定量方法,通过测量溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质浓度。吸光度与溶液中的蛋白质浓度成正比,因此可以通过已知的蛋白质吸光系数和稀释倍数来计算蛋白质浓度。

蛋白质的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三种。

一般情况,当溶液中的蛋白质浓度增加时,显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增加,因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。

2、蛋白质的定量方法有哪几种?

蛋白质的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三种。

定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。考马斯亮蓝法(Bradford法)。

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。

种蛋白质含量的测定方法 直接测定UV法 这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。

3、蛋白质组学研究的主要步骤

在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织,如肿瘤组织与癌旁正常组织,然后裂解组织和细胞,抑制蛋白酶活性,出去非蛋白质的DNA,RNA,脂类等物质,溶解蛋白质,溶解并抽提总蛋白质。

蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面:蛋白质标本的制备及分离:寻找较好的方法尽可能完全地抽提细胞或组织中的全部蛋白质是比较蛋白质组学研究的重要前提。

蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。

蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面。

4、测定蛋白质的定量的方法有哪些及其原理各是什么

测定蛋白质的定量的方法:(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋 白质溶液测定的方法。

间接测定法:蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素,以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

Bradford法测定bai蛋白质浓度:实验原理。双缩脲法(duBiuret法)和zhiFolin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制dao,促使科学家们去寻找更好的蛋。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右,因此,通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质),即: 蛋白质含量=含氮量/16%。

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