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蛋白组学蛋白质表达谱(蛋白质组学图)

蛋白组学蛋白质表达谱(蛋白质组学图)

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  1. 蛋白组学如何筛选差异蛋白?

1、蛋白组学如何筛选差异蛋白?

利用如STRING、BioGRID等数据库,构建蛋白质之间的相互作用网络。(2)识别关键蛋白或亚网络,它们可能在疾病或特定生物过程中起到中心作用。验证:使用西方印迹、免疫荧光等技术,对筛选出的关键差异蛋白进行实验验证。

在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织,如肿瘤组织与癌旁正常组织,然后裂解组织和细胞,抑制蛋白酶活性,出去非蛋白质的DNA,RNA,脂类等物质,溶解蛋白质,溶解并抽提总蛋白质。

先进行等电聚焦电泳(按照蛋白等电点pI分离):在胶中加入双性电解质溶液,加上电场后建立稳定PH梯度,蛋白质溶液加入后建立电场,蛋白以不同PI分离开来。

蛋白质标本的制备及分离:寻找较好的方法尽可能完全地抽提细胞或组织中的全部蛋白质是比较蛋白质组学研究的重要前提。蛋白质图像的差异对比分析:给予双向电泳所获得的凝胶图谱,可用图像分析软件进行分析对比。

如果想从几组样品中寻找差异蛋白,特别需要做一次SDS-PAGE检测同类样品蛋白的提取效率。 以上图为例,0号样品中间的条带不见了,可能是提取蛋白不充分引起的差异,也可能是样品本身的差异。

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