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蛋白质组学和WB结果不一致,蛋白质组学与基因组学

蛋白质组学和WB结果不一致,蛋白质组学与基因组学

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  1. 为什么western blot结果中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同

1、为什么western blot结果中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同

通过校正曲线,就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。

将样品中的蛋白质根据分子量大小进行分离是Western blot的关键步骤。通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)来实现这一目的。在SDS-PAGE中,通过将蛋白质样品经过电泳使其在凝胶中迁移,根据分子量不同而分离成不同的条带。

蛋白质磷酸化后分子量变大。设计实验:空白组(阴性对照),蛋白质A基因敲除,western blot检验蛋白B;实验组,对蛋白质A进行RNA干扰,干扰前后分别进行western,也针对B;阳性对照,AB同时表达,对B做western。

这是因为,蛋白质在电泳过程中会受到电场力的作用,根据它们的分子大小和电荷大小而在凝胶中移动的速度不同,从而形成不同的带。

所以,严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时,借助参照体系很容易就可以查出问题所在,而不必抓耳挠腮怨天尤人。

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