蛋白质组学设计实验(如何利用蛋白质组学设计实验)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于蛋白质组学设计实验的问题,于是小编就整理了5个相关介绍蛋白质组学设计实验的解答,让我们一起看看吧。
1、设计性实验:植物组织内可溶性蛋白质的提取和含量测定
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定如下:当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生。
样品的提取:称取鲜样0.5g,用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。取0ml(视蛋白质含量适当稀释)样液加入试管中,然后重复步骤2的(2)、(3)、(4),以标准曲线中的0管为空白,测定吸光值。
样品的提取:称取鲜样0.5g,用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。取0ml(视蛋白质含量适当稀释)样液加入试管中,然后重复步骤2的(2)、(3)、(4),以标准曲线中的0管为空白,测定吸光值。
检测原理:考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blueG-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
2、蛋白质鉴定实验
选择高蛋白的食物浆液,比如豆浆和蛋清。然后准备检测蛋白质的双缩脲试剂,由A液和B液组成,A液:氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液。B液:硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
对物体进行灼烧,看是否能闻到烧焦的羽毛味,如果可以闻到烧焦的羽毛味,那么证明有蛋白质的存在。蛋白质和浓HNO3进行反应,如果能够变性产生黄色不溶性物质,那么该物体是蛋白质。
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。
蛋白质鉴定的研究方法:(1)凯氏定氮法:根据氮在蛋白质分子中含量恒定(平均占16%),因此测定出样品中氮的含量后,即可求出样品中蛋白质含量。
3、蛋白相互作用研究方法有哪些?
研究蛋白质/ 核酸相互作用近期采用的新技术有:核酸适体技术、生物信息学方法、蛋白质芯片技术以及纳米技术等。
\x0d\x0a\x0d\x0a酵母双杂交系统\x0d\x0a酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。
f、拉下实验。研究蛋白质/ 核酸相互作用近期采用的新技术有:核酸适体技术、生物信息学方法、蛋白质芯片技术以及纳米技术等。
噬菌体展示技术,将编码“诱饵”蛋白的DNA片段插入噬菌体基因组,并使之与噬菌体外壳蛋白编码基因相融合。
4、【蛋白质组学】技术介绍及3-10分的文献思路介绍
蛋白质组学技术于1996年由澳大利亚学者Wilkins等最早提出。
【答案】: 蛋白质组学(Proteomics):指在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质表达水平,翻译后修饰,蛋白与蛋白相互作用等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全面的认识。
蛋白质组学研究的基础技术主要包括以下两个方面:二维电泳 (2-DE):二维电泳是一个用于分离蛋白质的技术,其中第一维度是按照蛋白质的等电点分离,而第二维度是按照蛋白质的分子量分离。
蛋白质组学三大基本技术有:质谱技术、SDS-PAGE 技术、免疫淋巴细胞技术。
5、蛋白质组学实验设计、质控与分析
蛋白质组学的研究策略主要包括如下:质谱法:通过测量蛋白质的质量来研究其特性,包括串联质谱技术(MS/MS)用于确定蛋白质的氨基酸序列和翻译后修饰等信息。
蛋白质样品的制备:蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节,也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。
蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。
利用2D-PAGE进行差异蛋白质组学分析的缺点主要在于:对盐,DNA等杂质高度敏感。对于溶解度低的输水性蛋白质,酸性,碱性蛋白质效果不好。对PH和MW的范围有所限制。耗时,无法自动化。
蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面:蛋白质标本的制备及分离:寻找较好的方法尽可能完全地抽提细胞或组织中的全部蛋白质是比较蛋白质组学研究的重要前提。
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