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1. 蛋白质测序的测定步骤

1、蛋白质测序的测定步骤

多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链（亚基）.2 测定蛋白质分子中多肽链的数目。

选择高蛋白的食物浆液，比如豆浆和蛋清。然后准备检测蛋白质的双缩脲试剂，由A液和B液组成，A液：氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液。B液：硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

基本过程是将蛋白质被打成单电荷片段，通过电磁偏转得到一系列长度不等的片段，由于可测得质量，将片段排序，就可知道某个位点的氨基酸的质量，进而得知氨基酸的种类，重复此过程，可得知所有氨基酸的种类，进而得知蛋白质的序列，一般都是以及序列的信息，毕竟蛋白质测序之前要经过预处理。

Eadam降解法是一种化学法对蛋白质进行测序的方法，是从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。

双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2 与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

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