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1. itraq实验对蛋白浓度有什么要求

1、itraq实验对蛋白浓度有什么要求

样品 （3） iTRAQ/TMT项目设计 体外等重同位素标记定量技术，可同时比较多个样本之间的蛋白表达量差异（通常10个样本以下）。 基本原则 ：（4） Labelfree项目设计 Labelfree是通过比较肽段母离子质谱峰强度，分析不同来源样品蛋白的表达量差异。该技术无需昂贵的同位素标记做内标。

而如果是相对定量，如itraq这种技术，比的是不同样本中同一种蛋白含量相对高低，结果给出的是一个蛋白在不同样本中上调/下调几倍，这样必须要求相比较的样本起始量是相等的。比如常见的werstern实验中，比较一个蛋白在不同样本的表达量高低，上样量也是要求蛋白总量一致。

超滤： 可以截留10kDa及以上的蛋白分子，适用于体积较小的样品。操作步骤可以是，从100μL超滤浓缩到40μL，再加缓冲液至100μL，再超滤到40μL，反复几次。

它含有14种蛋白抗体，针对血清中的高丰度蛋白能很有针对性地去除，需要的样品量通常为20μL-40μL，20μL的血清样品可以得到约100微克的蛋白样品，40μL的量足够我们做一次iTRAQ或label free实验了。 第三种试剂盒是Thermo的Pierce Albumin/IgG的试剂盒，可以去两个高丰度蛋白。

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