蛋白质研究组学,蛋白质组学研究的基本流程
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1、蛋白质组学的研究策略是什么
蛋白质组学的研究内容包括:蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Westemn等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如湖化,糖基化,酶原激活等。
双向电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)与质谱(mass spectrum, MS)的结合是最常见的蛋白质组学的研究手段。双向电泳包括第一向等电聚焦(Isoelectric focusing, IEF)和第二向SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)。
双向电泳技术(理想目的:将细胞(或组织)内所有蛋白质都分离开来)质谱技术及一系列派生技术 (测蛋白质序列)3 、蛋白质互相作用研究:酵母双杂交,细菌双杂交,免疫共沉淀技术,pull-down,FRET,BiFC等 蛋白质定位:荧光标记技术,共聚焦荧光显微镜技术,免疫荧光,免疫化学等技术。
蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离。胶染色后可以利用凝胶图象分析系统成像,然后通过分析软件对蛋白质点进行定量分析,并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。
此外,通过表达载体进行蛋白质的体外扩增和纯化也并非易事,从而难以制备大量的蛋白质。蛋白质组学的兴起对技术有了新的需求和挑战。蛋白质组的研究实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析,往往要同时处理成千上万种蛋白质。
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