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做蛋白质组学的尿素纯度(蛋白质尿素氮)

做蛋白质组学的尿素纯度(蛋白质尿素氮)

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  1. 尿素在蛋白质纯化中的作用

1、尿素在蛋白质纯化中的作用

蛋白溶解液中常用试剂包括尿素、硫脲、CHAPS、DTT、IPG buffer等,尿素和硫脲是离液剂(变性剂),高浓度尿素和硫脲能够破坏蛋白质分子间形成的氢键,防止由氢键引起的蛋白质聚集以及蛋白迁移过程中二级结构的形成。CHAPS是两性表面活性剂(去垢剂),可以溶解疏水基团,增强蛋白的在其pI值处的溶解性。

尿素是常用的蛋白变性剂,不过其具体的作用机理其实不是很清楚的,但是加入了尿素后蛋白质就会展开,丧失高级结构而变成肽链,没有了结构的保护蛋白的抗水解作用就弱了很多,因此可以大大减少水时间。这种方法肯定是管用的。

变性在这里并不恰当。我想你的意思是在分离纯化中保持蛋白的活性。 温度控制是很重要的,其一,蛋白酶在低温时往往是活性很低的,因此可以减少对我们蛋白的分解。其次,低温时微生物生长缓慢,也减少了微生物因素对蛋白的分解。 第三,一些蛋白质并不是十分稳定,时间长了就会趋向于疏水基团聚集而沉淀。

这种观点被国内外许多生物化学教科书所采用。但Kamoun的一部作品《尿素致球状蛋白质变性作用:是破坏氢键还是疏水键》一文中,他的观点是尿素致球状蛋白质变性作用是破坏疏水键。

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