蛋白质组学流程和核心技术(蛋白质组学的基本技术流程)
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1、蛋白质组学的研究技术
目前蛋白质组学研究在表达蛋白质组学方面研究的最为广泛,其分析通常有三个步骤:第一步、运用2-DE技术分离样品中的蛋白质;第二步、应用质谱技术或N末端测序鉴定2-DE分离的蛋白质;第三步、应用生物信息学技术存储、处理、比较获得的数据。
蛋白质组学三大基本技术有:质谱技术、SDS-PAGE 技术、免疫淋巴细胞技术。质谱技术:质谱技术是蛋白质组学中最常用的和最基本的技术,它可以检测和识别各种生物样品中的蛋白质和其他大分子有机物,从而可以提高研究的准确性,特别是在研究动态蛋白信号转导及表观遗传因子的时候,质谱技术的应用更加广泛。
LCM技术获得的细胞可以用于蛋白质样品的制备。蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离。胶染色后可以利用凝胶图象分析系统成像,然后通过分析软件对蛋白质点进行定量分析,并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。
双向电泳技术(理想目的:将细胞(或组织)内所有蛋白质都分离开来)质谱技术及一系列派生技术 (测蛋白质序列)3 、蛋白质互相作用研究:酵母双杂交,细菌双杂交,免疫共沉淀技术,pull-down,FRET,BiFC等 蛋白质定位:荧光标记技术,共聚焦荧光显微镜技术,免疫荧光,免疫化学等技术。
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