蛋白质组学的质控,蛋白质组学的设计原理
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1、蛋白质组学的研究策略是什么
蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。
蛋白质组的研究实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析,往往要同时处理成千上万种蛋白质。因此,发展高通量、高灵敏度、高准确性的研究技术平台是现在乃至相当一段时间内蛋白质组学研究中的主要任务。
四 定量蛋白质组学方法:⑴ ICAT(isotope-coded affinity tags)方法。ICAT是用于定量蛋白质组学研究的稳定同位素标签法的一种。
蛋白质组学一经出现,就有两种研究策略。一种可称为“竭泽法”,即采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质,这种观点从大规模、系统性的角度来看待蛋白质组学,也更符合蛋白质组学的本质。
“蛋白质组学”则是专门研究细胞内总体蛋白质(蛋白质组)的表达和运转等一切功能活动规律的新学科。
2、蛋白质组学实验设计、质控与分析
蛋白质组学的研究策略主要包括如下:质谱法:通过测量蛋白质的质量来研究其特性,包括串联质谱技术(MS/MS)用于确定蛋白质的氨基酸序列和翻译后修饰等信息。
蛋白质样品的制备:蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节,也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。
蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。
利用2D-PAGE进行差异蛋白质组学分析的缺点主要在于:对盐,DNA等杂质高度敏感。对于溶解度低的输水性蛋白质,酸性,碱性蛋白质效果不好。对PH和MW的范围有所限制。耗时,无法自动化。
3、2. 蛋白质组学样品前处理(3)
第一种情况,由于这是同样类型的样品,比如都是小鼠肌肉组织,一个样品的蛋白质抽提充分,而另外一个样品蛋白抽提不充分,就会导致两条带不一样,这种情况下需要重新抽提。
研磨或超声破碎样品,为了减少人为操作引入的修饰,通常会准备大量的冰,进行冰上的操作。同时还需要加入蛋白酶抑制剂,防止在操作过程中蛋白被样品中自带的蛋白酶降解掉。
第一种情况,由于这是同样类型的样品,比如都是小鼠肌肉组织,一个样品的蛋白质抽提充分,而另外一个样品蛋白抽提不充分,就会导致两条带不一样,这种情况下需要重新抽提。
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用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。选择性变性沉淀法 (1)例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶,可以通过加热进行热处理,使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。
到此,以上就是小编对于蛋白质组学的质控的问题就介绍到这了,希望介绍关于蛋白质组学的质控的3点解答对大家有用。
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