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蛋白质组学验证步骤-蛋白质组学实验步骤

蛋白质组学验证步骤-蛋白质组学实验步骤

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  1. 蛋白质组学研究的主要步骤

1、蛋白质组学研究的主要步骤

蛋白质组学研究的主要步骤如下:蛋白质样品的制备:蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节,也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。蛋白质的分离:双向凝胶电泳技术是目前最基础和常用的蛋白质分离方法,它能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术。

目前蛋白质组学研究在表达蛋白质组学方面研究的最为广泛,其分析通常有三个步骤:第一步、运用2-DE技术分离样品中的蛋白质;第二步、应用质谱技术或N末端测序鉴定2-DE分离的蛋白质;第三步、应用生物信息学技术存储、处理、比较获得的数据。

应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学研究主要步骤有:在应用2D-PAGE研究差异蛋白质组学问题时首先要获得要进行差异比较的组织,如肿瘤组织与癌旁正常组织,然后裂解组织和细胞,抑制蛋白酶活性,出去非蛋白质的DNA,RNA,脂类等物质,溶解蛋白质,溶解并抽提总蛋白质。

蛋白质组学的研究内容包括:蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Westemn等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如湖化,糖基化,酶原激活等。

蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面。

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