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1. 细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

1、细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是2～4。

工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台（至少ClassⅡ）。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。

细胞培养的步骤包括取材、分离和培养，注意事项包括严格无菌操作、选择适当的培养液和保持一致的小牛血清来源。取材阶段：根据不同组织的特点，采用相应的取材方法，确保材料的新鲜和严格无菌，以避免细胞污染。

工作人员在操作时务必穿戴实验衣和手套，特别是处理可能携带病毒的细胞株时，需使用至少ClassⅡ级别的无菌操作台。操作过程中，需注意防止气溶胶生成，谨慎使用有毒物质如DMSO和TPA，同时避免针头伤害。

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