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蛋白核细胞分离-细胞核里的蛋白

蛋白核细胞分离-细胞核里的蛋白

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  1. 细胞中核小体中的组蛋白和DNA怎样分离

1、细胞中核小体中的组蛋白和DNA怎样分离

他们先用小球菌核酸酶稍稍消化一下染色质,切断一部分200核苷酸对单位之间的DNA,使其中含有单体、二聚体、三聚体和四聚体等。然后经离心将它们分开。每一组再通过凝胶电泳证明其分子大小及纯度。

DNA与组蛋白构成核小体,核小体缠绕成中空的螺旋管状结构,即染色丝,染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中,外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞,然后破碎胞膜及核膜,使染色体释放出来,同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。

用1%甲醛等能穿透细胞的可逆的化学交联试剂将核小体中的组蛋白与DNA轻微交联,分离染色质。用超声处理仪切割DNA到平均3个核小体长度,用抗乙酰化或甲基化组蛋白的特异性抗体进行免疫沉淀,提取逆转交联后沉淀下来的DNA,PCR扩增特定的DNA片段即可。

接着Hewish和Burgoyun(1973年)用内源核酸酶消化细胞核,再从核中分离出DNA,结果发现一系列DNA片段,它们相当于长约200bp的一种基本单位的多聚体。表明组蛋白结合在DNA,以一种有规律的方式分布,以致产生对核酸酶敏感的只是某些限定区域。

DNA和组蛋白;人们接着用化学交联、高盐分离组蛋白,以及X衍射等方法进一步研究组蛋白多聚体的结构、排列以及怎样和DNA结合的,从而建立了核小体模型。1984年Klug和Butler进行了修正。核小体的构造可表示:每一个核小体结合的DNA总量为200bp左右,一般在150~250变化范围轻微消解染色质而得知的。

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