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1. 如何从脾脏、胸腺和淋巴结制备小鼠细胞悬液?

1、如何从脾脏、胸腺和淋巴结制备小鼠细胞悬液?

脾脏细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前最好先去除红细胞（RBC） 。胸腺和淋巴细胞悬液则不必去除红细胞。脾脏细胞的亚群分离也需先去除红细胞。附加材料 ACK 裂解缓冲液 步骤 每个脾脏用约5ml 裂解缓冲液悬浮脾脏细胞；一个12ml 试管可用于裂解一个或两个脾脏，也可以用50ml 离心管裂解更多的脾脏。

将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 （3）把脾放入5ml含有5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。 （4）用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入小试管中。

造模3小时后取材。由尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液1×106个细胞/0.2ml/只。混合方法：小鼠一次全身0Gy60Coγ射线照射后，分照射后，6天腹腔注射环磷酰胺50.0mg/kg及氯霉素65mg/kg。化学方法：用苯 玉米油，3次/w，别在第背部皮下注射，共注射15次。

取8～10周龄同系小鼠，断颈处死后，无菌操作腹腔内注射10～15ml完全培养液，用消毒拇指轻揉腹部数次后， 吸回腹腔液体，调整细胞浓度为1105/ml。 一般一只小鼠腹腔液可获取细胞3～5106，可供一次融合用。亦可取两只小鼠腹腔巨噬细胞混合使用。

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