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1. 小鼠全血离心速度和时间
2. 小鼠眼球取血技巧是什么?
3. 简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

1、小鼠全血离心速度和时间

小鼠喂药取血需要20到30分钟。根据查询相关公开信息显示，小鼠喂药取血的过程复杂，需要20到30分钟完成，在采血后，需要立即将血液放入5mL离心管（不需加抗凝剂或防腐剂），让血液在室温下静置30-60分钟。

然需要静置，时间没有具体要求，只要凝固了就行，转速可以高一些，时间5~10分钟就可以。

若用EDTA钾盐血样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理用ACD或肝素抗凝，血样在48h以内，尽早（8h）处理。静脉采集血样运用EDTA钾盐真空管，采集后立即颠倒混匀8--10次，使血液与抗凝剂混匀，对样品编号、日期、采集时间。

每分钟2000转，离心10min。根据生物器材网得知，将红细胞进行充分的清洗，一般用等渗的稀释液，每分钟2000转，离心10min，重复3到4次。

2、小鼠眼球取血技巧是什么?

用毛细管定量吸取尾血。采血完毕用棉球压迫止血 2 、中等量取血：眼眶静脉丛采血 ——左手拇指及食指紧紧握住小鼠颈部，压迫颈部两侧使 眶后静脉丛充血，但用力要恰当，防止动物窒息死亡。

对小白鼠来说最常用的方法是眼眶取血，即用毛细管刺入小鼠眼眶。

眼眶取血：将小鼠抓牢固定，用拇指和食指将眼部皮肤扒开，使眼球充分突出，眼窝内眦处为眼静脉窦。将毛细管由此刺入，捻转，轻轻外提，使血液充满毛细管，采血后用一块干纱布将眼合上数分钟以止血。

一人抓大鼠并用眼科弯镊摘眼球，一人用止血钳夹住大鼠的嘴部以固定大鼠头部，另一个人拿试管接血。 大鼠在挣扎过程中，很容易导致血液丢失，因此固定头部很重要，否则只有眼看着血液乱飞，却不入试管。

3、简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。

离心法的原理是，不同种类的细胞，其大小、形态、密度、质量等物理性质不同，在离心力的作用下，它们具有不同的沉降速率，从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。

机械法：利用物理外力，如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法，将细胞分离开。优点：操作简单，不使用有毒和致癌物质。缺点：对于细胞脆弱的情况，会造成细胞损伤。

细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。

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