细胞裂解液分离法-细胞裂解液使用方法
作者:admin • 更新时间:2024-08-31 16:36:05 •阅读
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于细胞裂解液分离法的问题,于是小编就整理了1个相关介绍细胞裂解液分离法的解答,让我们一起看看吧。
1、westernblot实验步骤?
Western,也叫 Western blot, Western blot blot, Western印迹法,是检测蛋白质抗体的重要方法之一。
实验步骤:
1.用块称量。
2.用液氮,将组织块粉碎。
3.加入 RIPA缓冲剂(每克组织3 ml RIPA)、 PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF),继续保持4℃的 Polytron (每克组织3 ml RIPA)。
4. PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF),冰上孵化30分钟。
5.移入离心管,4℃大约20,000 g (15,000转)。
6.将上清作为细胞裂解液,分装-20℃保存。
7.蛋白质浓度测定采用 Bradford比色法。
8.取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度),加2×电泳加样缓冲液。
9.用开水浴3分钟。
10.上样。
11.电泳(浓缩胶20 mA,分离胶35 mA)。
12.转膜仪转膜(100 mA 40分钟)。
13.薄膜为丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色。
14.显色 Westernblot试剂盒。
15.比较记录分析。
到此,以上就是小编对于细胞裂解液分离法的问题就介绍到这了,希望介绍关于细胞裂解液分离法的1点解答对大家有用。
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