细胞分离液配方分析常见问题(细胞分离液配方分析常见问题有哪些)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于细胞分离液配方分析常见问题的问题,于是小编就整理了4个相关介绍细胞分离液配方分析常见问题的解答,让我们一起看看吧。
1、常用染色剂的分离液
涂片经火焰固定,加结晶紫液染1min,清水冲去染液。(用滤纸吸去玻片上水分)加碘液染1min,水洗。(吸去水分)加脱色液,不时摇动约10~30秒,至无紫色脱落为止,水洗。
配方三 乐氏(Locke’s)生理盐水氯化钠 0克 碳酸氢钠 0.1~0.3克氯化钾 0.42克 氯化钙 0.24克把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解,混合后加蒸馏水到980毫升。
龙胆紫染液,醋酸洋红液。染色质(体)容易被碱性染料染成深色。
细菌染色剂配方一 齐氏(Ziehl)石炭酸品红染液甲液 取石炭酸5克,溶解在95毫升蒸馏水中。乙液 取0.3克碱性品红,放入研钵中研磨,逐渐加入10毫升95%酒精,继续淹没,使它溶解。
2、红细胞裂解液配制方法有哪些?
裂解液配制:确实,ACK裂解液相对更为温和。其配方为:取29克NH4CL、00克KHCO32毫克Na2EDTA,溶解于1000毫升蒸馏水之中,调节pH值至2-4。该配方在实践中效果出色。
细胞裂解液(Tris-HCL)1.1MTris溶液的配置 取Tris242g,加ddH2O至1600ml,加热溶解。
对于组织细胞样品的处理,首先从4℃冰箱中取出红细胞裂解液(ELS),然后按照1:3至1:5的比例,将裂解液加入已经消化并分散成单个细胞的沉淀中。轻轻吹打混匀以确保细胞充分接触裂解液。
可以。红细胞裂解液的原理是利用细胞内外存在盐离子浓度差异而导致细胞膜胀破,直接用娃哈哈矿泉水水稀释就行了。红细胞裂解液的作用是裂解红细胞,简单来说就是破坏红细胞的形态及结构,从而达到培养或检验目的。
3、大鼠原代肝细胞分离,活率一直上不去,求助大神
肝细胞分离,有两个问题要注意的,就是一定尽量要快,时间长了影响细胞活力;另一个就是操作最好在冰上进行,还有大鼠要小点的,150-200g就可以了。消化应的问题,还是自己摸索为好,如果觉得多了可以试着减少用量吧。
如果血细胞去的非常干净,可以不用percoll分离 3,用低速离心(50g 2 min),死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值,但是维持1个月没问题。
阻断肝上下腔静脉(位置较深,分离结扎有难度,可用哈巴狗血管夹夹住,亦可用消毒棉签压迫)5,从门静脉内注入D-HANKS,直至肝下下腔静脉插管内流出来的液体中不含或含少量红细胞,肝脏呈米黄色。
谷康定等用2步灌流法制备大鼠原代肝细胞,经MC-LR处理后,数小时后细胞形态学即发生改变,其灵敏度可达μg/L级。
4、原代细胞分离提取方法及注意事项
点。一要用酶制剂(最常用的是胰蛋白酶)处理组织块,除去细胞间质,使细胞相互分离,形成细胞悬液;二细胞生长方式多为单层( monolayer )。
原代细胞的提取方法包括:一般悬浮细胞,如血液细胞,就分离后,直接培养。培养组织中的细胞,就需要消化过后,进行培养,也有用组织块培养的。
两部灌流法的灌流液,ph值,氧气等因素,以及灌流时间很重要 如果血细胞去的非常干净,可以不用percoll分离 3,用低速离心(50g 2 min),死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。
注意事项 (1)无菌操作:细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因,必须加强各个环节的无菌操作观念,以预防为主,一旦污染,一般很难消除。(2)培养液:所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。
到此,以上就是小编对于细胞分离液配方分析常见问题的问题就介绍到这了,希望介绍关于细胞分离液配方分析常见问题的4点解答对大家有用。
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