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细胞的分离与计数实验-分离细胞器实验

细胞的分离与计数实验-分离细胞器实验

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  1. 到底怎样计数细胞呢?“稀释倍数”怎么计算?

1、到底怎样计数细胞呢?“稀释倍数”怎么计算?

一般来说,细胞的计数方法是:细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000×稀释倍数操作步骤:

1.取10ul细胞悬液与10ul台盼兰混合均匀于1.5ml离心管中。

2.盖上盖玻片,取10ul混合液自血球计数盘上方加入,于10倍生物显微镜下观察,活细胞不染色,死细胞被染成蓝色。

3.分别计数四个大方格,得到细胞总数,再除以4,乘以稀释倍数(本实验为2),最后乘以104,即为每ml细胞悬液中细胞数。

若细胞位于线上,只计上线与左线(计上不计下,计左不计右)。注:1.细胞数/ml=4大格细胞总数×稀释倍数×104/4;每一大格的体积为=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml2.计数板计数时,最适细胞浓度为5~10×105个/ml,此范围外计数误差偏大。

3.高浓度细胞悬液,可取出部分作稀释或连续稀释后计数。例活细胞数/方格:55,62,49,59;死细胞数/方格:5,3,4,6;细胞总数=243平均细胞数/方格=60.75;稀释倍数=2;细胞数/ml:60.75×104×2=1.22×106;细胞数/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106存活率:225/243﹦92.6%

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