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1. 外周血单核、巨噬细胞的分离和培养方法
2. 为何将组织分散成单个细胞培养
3. 树突细胞的树突细胞治疗肿瘤的流程及优点

1、外周血单核、巨噬细胞的分离和培养方法

巨噬细胞培养具有贴壁生长的特性，将上述PBMC至于细胞培养瓶中培养，淋巴细胞悬浮于培养液中，可以祛除，贴壁生长的就是单核巨噬细胞了。改变培养条件，就可以将其从贴壁上悬浮起来，稀释成适当浓度即可。

外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

PBMC分离方法的原理是基于血液成分不同的密度，通过在双重密度梯度中离心，利用较低密度部分的小分子浮力将红细胞沉淀，从而获得纯化的单克隆T细胞。

THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。

2、为何将组织分散成单个细胞培养

为何将组织分散成单个细胞培养如下：单细胞生物虽然只由一个细胞构成，但也能完成营养、呼吸、排泄、运动、生殖和调节等生命活动。单细胞生物主要分有核和无核的单细胞。有核的如草履虫就是典型的有核单细胞生物。

动物细胞培养，需要将细胞分散，因为，动物细胞当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。

细胞之间通过胶原蛋白，粘连蛋白等连接，胰蛋白酶能消化这些蛋白，使细胞间失去粘接，分散成单个细胞。

过程： 取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。

3、树突细胞的树突细胞治疗肿瘤的流程及优点

树突细胞的主要任务是携带肿瘤抗原递呈给T细胞，激活T细胞的抗肿瘤功能。另外，树突状细胞还能刺激B淋巴细胞增殖、成熟，并能刺激Th细胞、NK细胞活化，通过多种途径激活免疫功能。

接受治疗：根据专业医生的建议和指导，接受树突细胞疗法，以预防神经母细胞瘤的复发。需要注意的是，树突细胞疗法并非适用于所有神经母细胞瘤患者，具体适用情况需要由专业医生根据患者的具体情况来判断。

树突状细胞的吞噬能力较弱，但细胞表面积大，且有丰富的MHCⅡ类分子，所以捕获抗原和递呈抗原的能力很强。

日本树突状细胞疗法，就是活用树突细胞的优秀抗原递呈功能的疗法。树突细胞担任为T细胞提供有关攻击目标的癌症抗原（癌症标志物）信息方面的角色。接受癌症抗原信息后，T细胞以精确的方式攻击这种癌细胞。

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