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1. RNA不易分离的原因？

1、RNA不易分离的原因？

RNA不易分离常见原因及分析

1. 液相没有完全分开 混匀和匀浆不充分 通常此类问题是由于加了氯仿之后 不充分的 混匀以及随后在比较高的温度下离心引起。 正如实验操作流程中第 3 和第 4 步所述，在 加入氯仿后必须剧烈摇动混匀至少 15s，并且 随后在 4℃或者不高于 8℃的温度下离心，较 高的离心温度会破坏溶液分层。

2. 纯化柱堵塞 匀浆不充分 不充分的匀浆可能导致大块组织残留堵塞纯 化柱， 必要时请增加离心场和离心时间。 起始样品太多 起始组织样品不宜超过 100mg，必要时请减 少样品用量。

3. RNA 降解 样品或素材保存环境太差 状态不好，或者经过某些药物处理的 细胞或 组织中的 RNA 有可能会发生自发的降解，请 将标本存放于-80℃或者液氮中。如果能加入一些商业化的 RNA 酶抑制剂（如 RNA Later）， 效果会更好。

4. 样品采集 在采集到组织标本后尽快的使 RNA 酶丧失活性对防止 RNA 降 解是至关重要的。另外， 请尽量缩短处死到取样的时间，这样才能保证高纯度 RNA 的高得率。 裂解前样品操作 在把组织样品投入裂解液前，请保持冷冻的状态，在样品解冻之前，尽快将其投入含RNA 酶抑制剂的裂解液中，然后立即匀浆。离心条件加入氯仿之后的离心请务必在 4℃。

5. 电泳图显示降解 如果在电泳时总 RNA 上样超过 5μg，单一泳 道中的总 RNA 条带就会出现弥散和拖尾现象。一般电泳时总 RNA 的上样量为 700ng 至 800ng 左右。 外源 RNA 酶的污染在抽提总 RNA 的过程中，务必防止外源核酸酶的污染，整个过程始终需戴手套，并且经常更换以防止“手指残留RNA酶”污染。研钵和研杵必须在 180℃下烘烤过夜，以除去残留的

组织细胞总 RNA 提取失败常见原因及分析 1. 液相没有完全分开 混匀和匀浆不充分 通常此类问题是由于加了氯仿之后 不充分的。 裂解不完全会降低最后 得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。

细 胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除 外)。

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