细胞转染相分离,细胞转染方法比较
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1、dna染色过程?
DNA染色步骤如下:
1.提前一天细胞铺板
提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。
2.转染过程
⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。
⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。
⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。
⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。 注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加抗生素。
⑸培养4-6小时后更换培养基,继续培养24-48小时。 注意:①如细胞没有毒性等不良情况,转染后4-6小时可不必更换培养基。
1
吹打使其为细胞悬液,并且用PBS进行清洗.
2
离心细胞,1000r/min,10min,吸走上清夜。
3
固定细胞:加入固定buffer,15-30min,4℃。
4
涡旋(使细胞分开),加入5mL的70-80%的乙醇到细胞中。-20℃孵育2h。
5
清洗两次以去除乙醇。先用1X的PBS清洗,再用染液进行第二次清洗。
6
离心细胞,10min,1000-1500r/min,吸走上清液。
7
染色:调整细胞为10^6细胞数/test:加入0.5mL的PI/RNAse 染液。
8
室温孵育15min。
9
样品上机分析。
到此,以上就是小编对于细胞转染相分离的问题就介绍到这了,希望介绍关于细胞转染相分离的1点解答对大家有用。
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