1.  > 细胞分离

细胞转染相分离,细胞转染方法比较

细胞转染相分离,细胞转染方法比较

本篇文章给大家谈谈细胞转染相分离,以及细胞转染方法比较对应的知识点,希望对各位有所帮助,不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享细胞转染相分离的知识,其中也会对细胞转染方法比较进行解释,如果能碰巧解决你现在面临的问题,别忘了关注本站,现在开始吧!

  1. dna染色过程?

1、dna染色过程?

DNA染色步骤如下:

1.提前一天细胞铺板

提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。

2.转染过程

⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。

⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。 注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加抗生素。

⑸培养4-6小时后更换培养基,继续培养24-48小时。 注意:①如细胞没有毒性等不良情况,转染后4-6小时可不必更换培养基。

1

吹打使其为细胞悬液,并且用PBS进行清洗.

2

离心细胞,1000r/min,10min,吸走上清夜。

3

固定细胞:加入固定buffer,15-30min,4℃。

4

涡旋(使细胞分开),加入5mL的70-80%的乙醇到细胞中。-20℃孵育2h。

5

清洗两次以去除乙醇。先用1X的PBS清洗,再用染液进行第二次清洗

6

离心细胞,10min,1000-1500r/min,吸走上清液。

7

染色:调整细胞为10^6细胞数/test:加入0.5mL的PI/RNAse 染液。

8

室温孵育15min。

9

样品上机分析。

到此,以上就是小编对于细胞转染相分离的问题就介绍到这了,希望介绍关于细胞转染相分离的1点解答对大家有用。

[免责声明]本文来源于网络,不代表本站立场,如转载内容涉及版权等问题,请联系邮箱:3801085100#qq.com,#换成@即可,我们会予以删除相关文章,保证您的权利。 转载请注明出处:http://www.mxzdyx.cnhttp://www.mxzdyx.cn/xbfl/16586.html