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核质分离用什么刮细胞,细胞核的分离和纯化原理

核质分离用什么刮细胞,细胞核的分离和纯化原理

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  1. 核质分离具体步骤

1、核质分离具体步骤

样本制备:贴壁细胞用胰酶消化后加培养基终止,转移至EP管中。用冷的PBS洗2次,弃去上清。可直接进行后续实验或放在-80℃保存。 裂解:正确估算细胞体积,加入相应量的PCV,用移液器吹打细胞20-40次,剧烈震荡30s,冰浴15min,期间每5min震荡15s。

为了进行拟南芥核质分离实验,需要准备特定的缓冲液和试剂。实验流程如下:首先,称取2 g 10日龄的拟南芥幼苗,置于液氮中研磨。接着,将样品转移至预冷的离心管,并加入4 mL Honda buffer,颠倒混匀后置于冰上10 min,使其充分溶解。然后,使用Miracloth滤布过滤样品。

所有操作过程应在18-20℃中进行。仔细覆盖各种Percoll分层液,避免破坏其界面。洗涤分离细胞3次,以除去残存的Percoll分层液和血小板。如果所制备的细胞仍不纯,可使用包被有抗CD抗CD抗CD19抗体分子的磁珠,以除去残存的NK、T、B淋巴细胞。

收集细胞或组织,并进行核质分离。分别测量核和细胞质中目标分子的浓度或含量,例如用免疫印迹法或荧光染色法测量蛋白质含量,或用分子生物学技术测量核酸含量。计算核和细胞质中目标分子的相对含量比例,例如可以将核中目标分子含量除以整个细胞中目标分子含量来计算相对核含量比例。

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