细胞核密度梯度分离系统(细胞核密度梯度分离系统的特点)
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1、细胞组分分离的三种沉降方法
细胞组分的分离方法:离心,包括差速离心、密度梯度离心、速度沉降、等密度沉降,流式细胞术分选,层析技术、电泳技术等。
离心法的原理是,不同种类的细胞,其大小、形态、密度、质量等物理性质不同,在离心力的作用下,它们具有不同的沉降速率,从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。
外周血中除红细胞外,还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等,通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种:自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。
差速离心法是交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法,此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。
机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
2、细胞分离技术的离心技术
通过差速离心可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
差速离心和密度梯度离心。细胞结构成分离心分离的方法主要有两类,分别是差速离心和密度梯度离心。离心技术,是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一,也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法。
分离各种细胞器的方法分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器。
分离细胞器的方法有多种,其中最常用的是差速离心法。这种方法是通过逐渐增加离心机的转速和时间,使细胞器在不同转速下分离出来。将细胞样品放入离心管中,然后在低速离心机中离心一段时间,使细胞沉淀下来。
3、高中生物梯度离心去核为什么不破坏质膜?
如梯度离心,紫外光短时间照射,化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下,去除细胞核或使卵细胞核DNA变性,从而达到去核目的。
蔗糖密度梯度离心。用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化,为了研究高等植物细胞质膜上的质子泵ATP酶的作用机理,需要纯化细胞质膜,Hodges等首先使用蔗糖梯度法纯化燕麦根细胞质膜,广泛地应用着。
差速离心法(离心法):交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。
差速离心法:分离不同密度的结构的实验用到差速离心法,如线粒体、叶绿体等。差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。梯度离心法:分离核酸、蛋白质、核糖体亚基的实验用到梯度离心法。
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