细胞分离液percoll原液(细胞分离素怎么使用)
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1、速度区带离心和差速离心的区别?
一)差速离心法
它利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别,在同一离心条件下,沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。操作过程中一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开,然后将上清液加高转速离心,分离出第二部分沉淀,如此往复加高转速,逐级分离出所需要的物质。
差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于其他分离手段之前的粗制品提取。
(二)速率区带离心法
速率区带离心法是在离心前于离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等),待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心。离心后在近旋转轴处(X 1 )的介质密度zui小,离旋转轴zui远处(X 2 )介质的密度zui大,但zui大介质密度必须小于样品中粒子的zui小密度,即ρ P >ρ m 。这种方法是根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带,达到彼此分离的目的。梯度液在离心过程中以及离心完毕后,取样时起着支持介质和稳定剂的作用,避免因机械振动而引起已分层的粒子再混合。
由于ρ P >ρ m 可知S>0,因此该离心法的离心时间要严格控制,既有足够的时间使各种粒子在介质梯度中形成区带,又要控制在任一粒子达到沉淀前。如果离心时间过长,所有的样品可全部到达离心管底部;离心时间不足,样品还没有分离。由于此法是一种不完全的沉降,沉降受物质本身大小的影响较大,一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。常用的梯度液有Ficoll、Percoll及蔗糖
速度不同,速度区带离心和差速离心的区别是速度不同。
而密度利用比重。
差速离心是每次用不同的转速将混在一起但是比重不同的结构或物质分开(某速度离心一次分离出一个),比如细胞器的分离; 密度梯度离心一般是一次离心让混合物中比重不同的分成不同的层。
速度区带离心和差速离心是两种常见的离心机。速度区带离心通过调整离心机内的速度梯度来分离物质,适用于分离密度差异较大的混合物。而差速离心则通过调整离心机内的转速差来实现分离,适用于分离密度差异较小的混合物。
此外,速度区带离心的分离效果较好,但操作复杂,适用范围较窄;而差速离心操作简单,适用范围广,但分离效果相对较差。
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