动物细胞高效分离-动物细胞分离方法
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1、原代细胞分离提取方法及注意事项
点。一要用酶制剂(最常用的是胰蛋白酶)处理组织块,除去细胞间质,使细胞相互分离,形成细胞悬液;二细胞生长方式多为单层( monolayer )。
原代细胞的提取方法包括:一般悬浮细胞,如血液细胞,就分离后,直接培养。培养组织中的细胞,就需要消化过后,进行培养,也有用组织块培养的。
两部灌流法的灌流液,ph值,氧气等因素,以及灌流时间很重要 如果血细胞去的非常干净,可以不用percoll分离 3,用低速离心(50g 2 min),死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。
注意事项 (1)无菌操作:细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因,必须加强各个环节的无菌操作观念,以预防为主,一旦污染,一般很难消除。(2)培养液:所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。
原代细胞产品专家齐氏生物提醒,原代细胞培养注意事项,供参考:实验材料要新鲜,从活体分离材料后要低温保存,并尽快进行细胞分离实验。无菌操作。操作时用的培养液,可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
2、利用培养基限定法纯化动物细胞的方法利用培养基限定法纯化动物细胞的方...
培养规模。由于各种固定化系统可以获得相同的细胞密度,且细胞的产率主要取决于细胞的扩散,因此反应器的体积是培养规模放大的主要决定因素。虽然微载体系统可以提供最大的单元操作,但其他系统也可以通过增加单元套数而获得放大。
、平板划线法是通过连续划线,将菌种逐步稀释分散到培养基表面,稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,分别涂布到培养基表面。当它们稀释到一定程度后,微生物将分散成单个细胞,从而在培养基上形成单个菌落。
悬浮培养方法:在悬浮培养前,对动物细胞的生长和生理特性进行充分的考察,是十分必要的,能为悬浮培养提供有益的参考。悬浮培养可以从两个方面入手,一是改变动物细胞的培养环境,实行阶段培养;二是进行代谢调控。
复苏 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
3、目前动物细胞培养液的去除细胞固液分离常采用哪种方法
通常可以采用单克隆稀释法或限制性稀释法来分离单个细胞。对于单克隆稀释法,可以通过限制性稀释来分离单个细胞,并在培养基中进行单个细胞的培养和筛选。
常用的破碎组织细胞的方法有:机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。渗透破碎法这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
动物接种 这是最原始的病毒培养方法。常用的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等,接种的途径有鼻内、皮下、皮内、脑内、腹腔内、静脉等。根据病毒种类不同,选择敏感动物及适宜接种部位。鸡胚接种鸡胚对多种病毒敏感。
无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
分离各种细胞器的方法分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器。
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