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1. 有谁知道细胞培养的详细步骤
2. 原代细胞的分离培养
3. 原代细胞的提取方法包括哪些?

1、有谁知道细胞培养的详细步骤

细胞培养是在实验室中通过人工方法培育和繁殖细胞的过程，细胞培养的一般步骤包括：细胞株选择和准备、培养基配制和消毒、细胞接种、培养条件控制、细胞培养和维护、细胞检测和鉴定。

复苏 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

消化分离　消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。 培养　细胞悬液用计数板进行细胞计数。

滴胰酶消化）。加完胰酶要轻微晃动培养瓶或培养板，使胰酶能够覆盖贴壁细胞；清洗所用的PBS的量，是培养基量的一半；25ml培养瓶长满细胞大约有 个细胞；HUVEC传到第4代后就不能用了。

2、原代细胞的分离培养

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。

漂洗 将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入，中止消化反应，采用漂洗法洗 2-3 次后，加入完全培养基。

静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h （必要时72h）内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。

原代细胞的提取方法包括：一般悬浮细胞，如血液细胞，就分离后，直接培养。培养组织中的细胞，就需要消化过后，进行培养，也有用组织块培养的。

3、原代细胞的提取方法包括哪些?

获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一，原代细胞分离的方法有很多种：悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等。

原代细胞是通过如酶法或机械法或生长法使细胞从人体和动物的母体器官、组织或液体中分离出来，并在受控环境条件下分离的细胞在体外或其他人体和动物体内生长，以上便是提取细胞来源 。

细胞的提取是实验的第一步，常用的提取方法包括化学法、机械法和酶解法等。各种方法的选择应根据实验的目的、材料的特性和所需的细胞类型确定。化学法是提取细胞的常用方法之一，主要利用生物学中的化学特性来分离或提取细胞。

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。

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