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1. 一、简述干细胞分离纯化的主要方法 二、简述干细胞体内体外的检测方法...
2. 对胚胎干细胞的鉴定包括哪些方法。
3. 请教专家,怎样分离提取人精原干细胞?
4. 大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养
5. 成体干细胞的检测方法

1、一、简述干细胞分离纯化的主要方法 二、简述干细胞体内体外的检测方法...

目前常用的分离MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞在低血清培养基中有贴壁优势特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化及扩增MSC的目的。

分离细胞，进行细胞培养，并对其分化进行控制，通常采用加入生长因子或向细胞内引入新基因的方法，进而观察细胞的分化方向。

这明显不同于普通的细胞。通过贴壁法或percoll等细胞分离介质只能获得混合的骨髓基质细胞，只有应用免疫磁珠、流式细胞仪等将其进一步分离纯化后，才能称为骨髓间质干细胞。

材料和方法： MSCs体外分离培养：将肝素抗凝的骨髓用密度梯度离心 法（过percoll细胞分离液）分离出单个核细胞，体外培养贴壁细胞，传3代后得 到纯度和数量均较高的MSCs，经60Co照射后作为实验细胞。

2、对胚胎干细胞的鉴定包括哪些方法。

【答案】：胚胎干细胞鉴定常用的方法如下：①形态学检测：胚胎干细胞经过几个月的培养和传代培养后，仍保持自我更新和复制的能力。

胚胎干细胞（es细胞）的识别可依据其形态结构及核型来初步识别，进一步的识别则可用碱性磷酸酶（akp）染色法和鼠抗F9细胞单克隆抗体（SSEA一I）免疫荧光标记法判断。

具有非特异性，它不具有特异的组织特征，不能行使特异的组织功能，例如胚胎干细胞不能像红细胞那样携带氧气，能够进行长期的增殖和自我更新。具有发育的全能性，可以参加整个生物体的发育，构成人体的各种组织器官。

通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞具有自我更新复制的能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。

3、请教专家,怎样分离提取人精原干细胞?

分为多种干细胞的，如果是造血干细胞或骨髓间充质干细胞，最常用的，主要取骨髓，进行分离培养。

可事先给予G- CSF、GM- CSF等造血生长因子或化疗，动员 原始造血细胞进入外周血液循环，然后经“白细胞置换”采集和浓缩 造血干细胞。该方法最先用于自体移植，但是目前对异基因外周血 干细胞移植的兴趣却越来越大。

如果提取的量不是很大的话，对身体基本没有影响。干细胞是人身体的组织中存在的未分化细胞。经过特殊诱导可以分化成不同的身体组织，进而发育成器官。目前干细胞中的造血干细胞已经应用于临床，造福人类。

在大多数男性体内，精原干细胞可分化为精原细胞，再经过减数分裂可以形成成熟的、有功能的精子。但是在该试验中，精原干细胞在体外未能进一步分化和分裂。

孵育过程中不定期观察添加培养基，保证细胞孵育过程中有足够的营养。在培养20天后，通过分散器将来自3D培养的细胞消化成单细胞悬液。通过多种方法分析细胞、测序，以确定人的精子发生是否在体外发生。

4、大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养

取自SD大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用MSC完全培养液贴壁培养，传代扩增至第二代冻存。集落形成率5%，CD2CD90表达率70%， CD3CD4CD11b表达率5%，具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力。

外周血间充质干细胞怎么分离和培养 核酸探针技术又名基因探针技术或核酸分子杂交技术，具有敏感性高（可检出10-9―10-12的核酸）和特异性强等优点。

国人可以享受低价高效的顶尖技术，达到全系抗衰、器官修复、器官减龄的目的。 鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点，正日益受到人们的关注。

方法： （1）通过体外分离培养与提纯小鼠骨髓间充质干细胞，骨髓中性粒细胞。 （2）通过体外共培养体系，Annexin-V-PI标记，流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡情况。

它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为2-4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下，细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。

5、成体干细胞的检测方法

③体内分化实验，将胚胎干细胞注射给同种动物皮下，制作切片染色观察；④体外分化实验；⑤核型分析；⑥OCT活性检测。

观察干细胞的形态和生长速度：不同代数的干细胞在形态和生长速度上存在差异。第一代干细胞通常呈圆形或卵圆形，细胞核较大，细胞质较少；而第二代干细胞则呈长梭形或椭圆形，细胞核较小，细胞质较多。

干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。

过去人们普遍采用的干细胞鉴别方法主要有以下两种：①利用干细胞的慢周期性，采用标记滞留细胞的分析方法来识别在体的静息干细胞。②利用干细胞的自我更新能力，观察其在体外培养时表现出的无限的增殖能力来识别离体的干细胞。

ES细胞的分离方法：A： 免疫学方法 利用ES细胞所具有的特殊标记，借助荧光细胞分离器从单细胞悬液分离ES细胞。

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