分离t细胞和nk细胞的试剂盒,分离t细胞的方法
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于分离t细胞和nk细胞的试剂盒的问题,于是小编就整理了3个相关介绍分离t细胞和nk细胞的试剂盒的解答,让我们一起看看吧。
1、结核感染T细胞检测试剂盒(免疫斑点法)怎么用
抗原刺激外周血单核产生IFN-γ。IGRA利用结核分枝杆菌而非牛分枝杆菌BCG株系表达的抗原刺激外周血单核产生IFN-γ。检测结果在血样采集后12至18小时得出,报告结果分为阳性、阴性和不确定。
原理:利用结核特异抗原ESAT-6及CFP-10,通过酶联免疫斑点技术ELISPOT检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞,从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌(现症感染)。tspot试验即结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)。
其敏感性更高,而且只需24小时就能够得出检测结果。其检测结果不受机体是否接种卡介苗、是否免疫功能低下,或者感染其它环境分枝杆菌的影响。因此,在临床上对诊断不明确或者高度怀疑结核菌感染的患者,可以进行T-spoT检查。
应用酶联免疫法或者免疫斑点法检测特异性g-干扰素的释放。结果不受卡介苗干扰,提高了结果的特异性。
2、免疫细胞分类及分离方法
免疫细胞T 细胞及B 细胞的分离 将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱,B 细胞粘附于尼龙棉上,T细胞则不粘附,先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱,流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。
包括粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞,以及T细胞和B细胞。粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞是参与机体非特异性免疫作用的主要细胞。
B-1细胞主要识别胸腺非依赖性抗原(TI抗原),即非蛋白质类抗原如脂类、多糖抗原等,这些抗原可直接激活B细胞,无需Th细胞的辅助。B-2细胞介导对胸腺依赖性抗原(TD抗原)即蛋白质抗原的免疫应且须有Th细胞的辅助。
收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。 用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。
3、pbmc分离方法及原理介绍如下?
在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉皿与等量Hank‘s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
PBMC的提取方法: 利用Ficoll将全血分层,之后进行梯度离心, 血液就会分离成一层血浆,然后是一层PBMCs和一层多形核细胞(polymorphonuclear ),如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,和底层红细胞。
加入10mL PBS,离心300g×10分钟,洗涤细胞两次。 末次离心后,弃上清,加入含有10%FBS的RPMI1640,重悬细胞,计数,计算细胞活力。
方法: 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉血与等量Hank;s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。
如何从浓缩的白细胞中高效的分离PBMC 。
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