原代细胞分离纯化结果-原代细胞分离培养原理
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于原代细胞分离纯化结果的问题,于是小编就整理了4个相关介绍原代细胞分离纯化结果的解答,让我们一起看看吧。
1、描述细胞核的分离过程和鉴定结果?
细胞松弛素主要是破坏细胞骨架结构,细胞松弛素特异性的结合到微丝上,阻断微丝的组装。使得微丝去组装的速度大于组装速度,从而使微丝解体。有利于细胞核分离。
眼虫营分裂生殖时,核进行有丝分裂,分裂过程中核膜并不消失,随着细胞核中部收缩分离成两个子核,然后细胞由前向后纵裂为二(纵二分裂),其中一个带有原来的一根鞭毛,另一个又长出一根新鞭毛,从而形成两个眼虫。
将①、②、③涂片用l%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。结果 分别于高倍镜下观察三张涂片,描述镜下所见。
单个核细胞分离实验报告的写作应按照以下步骤进行:实验目的:明确实验的意义和作用。实验原理:阐述实验的依据和方法。实验步骤:详细记录实验过程。
前期; 是细胞分裂的开始。细胞外形一般变圆,中心体的中心粒分离,并向细胞的两极移动。四周出现发射状细丝。核膨大、脱氧核糖酸增多,核染色加深,不规则的染色质形成丝状染色体,并缩短变粗。
2、原代细胞的分离培养
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官,让它们在体外维持与生长。
漂洗 将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入,中止消化反应,采用漂洗法洗 2-3 次后,加入完全培养基。
静置培养:原代细胞在消化分离后,置于CO2培养箱的头24~48h (必要时72h)内,应处于绝对静置状态,切忌不时地取出培养瓶观察生长状况,这将使原代分离细胞难以贴壁,更谈不上伸展和增殖,初学者尤应注意。
原代细胞的提取方法包括:一般悬浮细胞,如血液细胞,就分离后,直接培养。培养组织中的细胞,就需要消化过后,进行培养,也有用组织块培养的。
3、...从原代培养物或细胞系中选择和纯化可以获得细胞株。 这句话对吗...
正是。通过纯系化或选择法从原代培养细胞或细胞系中分离出来的、具有特异性状或标志性状的细胞群体称为细胞株。
细胞培养10代(原代培养)就成为细胞株,10~50代(传代培养),此时为细胞株。少数细胞遗传物质发生改变,获得不死性(类似癌细胞),成为细胞系。
所以细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
细胞系(Cell Line):原代培养舞经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)所组成。
4、原代肝细胞中分离死细胞和活细胞
如果血细胞去的非常干净,可以不用percoll分离 3,用低速离心(50g 2 min),死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。我分离的通常在99%以上活性。成鼠肝细胞元代培养很难增值,但是维持1个月没问题。
阻断肝上下腔静脉(位置较深,分离结扎有难度,可用哈巴狗血管夹夹住,亦可用消毒棉签压迫)5,从门静脉内注入D-HANKS,直至肝下下腔静脉插管内流出来的液体中不含或含少量红细胞,肝脏呈米黄色。
肝细胞分离,有两个问题要注意的,就是一定尽量要快,时间长了影响细胞活力;另一个就是操作最好在冰上进行,还有大鼠要小点的,150-200g就可以了。消化应的问题,还是自己摸索为好,如果觉得多了可以试着减少用量吧。
区分活细胞和死细胞可以使用专门的染料,比如胎盘蓝或者PI。死细胞的膜不完整,所以染料会进入细胞,将细胞核中的核酸物质染色,而这些染料进不了活细胞,所以不会着色。
活细胞可以发生质壁分离现象,并在一定条件下发生质壁分离复原现象,而死细胞则不能,这是区别活细胞与死细胞的简便方法之一。
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