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1. 小鼠脾细胞的分离与观察实验原理
2. 掌握小鼠脾细胞分离的意义
3. 分离小鼠脾脏单个核细胞离心时间
4. 简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

1、小鼠脾细胞的分离与观察实验原理

本实验中将小鼠的脾脏放入尼龙指套内，置于少量PBS液中缓慢研磨，获得细胞悬液。实验中，我们发现尼龙指套不能滤去所有结缔组织，操作中会有结为絮状团块的结缔组织。

目的是使其彼此分离。将小鼠脾脏中各种不同比重的细胞通过离心沉降而达到使其彼此分离的目的。根据物理学颗粒沉降原理，不同密度的颗粒在其沉降运动中可因其比重的差别而处于不同的分布位置。

首先通过将小鼠脾脏组织进行机械或酶消化处理，可以获得单细胞悬浮液。其次将获得的小鼠脾细胞悬浮液放入含有营养物质和生长因子的培养基中，提供适宜的环境条件，使细胞能够在培养皿中生长和繁殖。

小鼠脾脏淋巴细胞在体外培养时是贴壁生长的。在体外培养时，需要将脾脏淋巴细胞悬液离心，去除组织碎片和杂质，然后将淋巴细胞重新悬浮在培养液中。在培养过程中，淋巴细胞会贴壁生长并增殖。

小鼠脾脏单个核细胞的活性鉴定的目的是掌握小鼠脾脏单个核细胞的分离和淋转的原理，方法是台盼蓝染色。

2、掌握小鼠脾细胞分离的意义

免疫细胞的分离和培养：通过脾细胞的提取和计数，可以将免疫细胞分离出来，并进行培养和扩增，用于研究免疫细胞的生物学特性和功能。

所以小鼠脾细胞提取和计数实验在生命科学研究中的意义是为了免疫学研究。

目的是使其彼此分离。将小鼠脾脏中各种不同比重的细胞通过离心沉降而达到使其彼此分离的目的。根据物理学颗粒沉降原理，不同密度的颗粒在其沉降运动中可因其比重的差别而处于不同的分布位置。

免疫学研究：小鼠脾细胞可以用于免疫细胞的分离、培养、染色、检测等，以研究免疫细胞的生物学特性，如免疫应答、细胞因子分泌、免疫记忆等等。

3、分离小鼠脾脏单个核细胞离心时间

小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各类免疫细胞。免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。

-8周。小鼠脾脏细胞提取需要多个细胞提取，所以用的是6-8周的鼠。小鼠是由小家鼠演变而来，它广泛分布于世界各地，经长期人工饲养选择培育，已育成1000多近交系和独立的远交群。

对于小鼠全血离心，速度和时间分别为2200-2500rpm和15分钟。

一）脾细胞 1．材料 （1）免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 （2）1640培养液 单克隆抗体制备流程 （3）5％FCS－1640营养液 2．操作方法 （1）拉颈或用CO2处死小白鼠。

研究细胞信号传导：脾细胞之间以及它们与其他免疫细胞之间的信号传递对于免疫反应的调节至关重要。通过分离小鼠脾细胞并进行体外培养，可以研究不同细胞类型之间的信号传递和相互作用，从而更好地理解免疫反应的调控机制。

4、简述主要免疫细胞分离方法和分离原理?

用毛细管伸至单个核细胞层中（位于细胞分离液与血浆的界面上），沿管壁轻轻吸出全部细胞。然后用Hanks液洗两次，每次2000r／min离心10min，最后用RPMIl640培养液将细胞配成2×106／m1的细胞悬液备用。

离心法的原理是，不同种类的细胞，其大小、形态、密度、质量等物理性质不同，在离心力的作用下，它们具有不同的沉降速率，从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。

机械法：利用物理外力，如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法，将细胞分离开。优点：操作简单，不使用有毒和致癌物质。缺点：对于细胞脆弱的情况，会造成细胞损伤。

细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。

PBMC分离方法的原理是基于血液成分不同的密度，通过在双重密度梯度中离心，利用较低密度部分的小分子浮力将红细胞沉淀，从而获得纯化的单克隆T细胞。

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