percoll分离中性粒细胞标准流程-中性粒细胞分选
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于percoll分离中性粒细胞标准流程的问题,于是小编就整理了3个相关介绍percoll分离中性粒细胞标准流程的解答,让我们一起看看吧。
1、全血中提取白细胞的方法
新鲜全血,红细胞裂解液(1:1),颠倒混匀数次,静置5min。10000g,4度,10min。此时可见白细胞沉淀和上层亮红色的液体。加入TRIzol,(106-107细胞加500ul),反复抽吸,直至有大量泡沫产生(细胞裂解的标志之一)。
你可以把血液放在试管上,加入抗凝剂,放置24小时后,你就会发现血液发生了分层现象。试管上层的是血浆,下层是血细胞(包括血小板和红细胞);中间隔了层白细胞。
直接处理抗凝的全血,即加入如Trizol的裂解液直接往下做。
白细胞计数,全血用稀酸溶液稀释后,冲入计数板,计数,再换算求出每升血液中的白细胞总数。记得要扣除有核红细胞的影响。
外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法: 试验步骤:取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min。小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中。在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min。
2、小鼠外周血中性粒细胞吞噬细菌的实验原理
胞吞作用。中性粒细胞吞噬过程属于胞吞作用,可以消化细菌。中性粒细胞(neutrophil)是在瑞氏(Wright)染色血涂片中,胞质呈无色或极浅的淡红色。
中性粒细胞的分离 新鲜的外周血或骨髓,用肝素抗凝,经淋巴细胞分离液分离,去除淋巴细胞和单个核细胞,用右旋糖酐(dextran,分子量=7~11 万) 沉降和低渗法去除红细胞,得到纯净的中性粒细胞。
中性粒细胞具有变形运动和吞噬活动的能力,是机体对抗入侵病菌,特别是急性化脓性细菌的最重要的防卫系统。当中性粒细胞数显著减少时,机体发生感染的机会明显增高。
吞噬细胞种类:①大吞噬细胞,包括血中的单核细胞、组织中巨噬细胞;②小吞噬细胞,主要是外周血中性粒细胞。
临床意义:(1)NBT还原试验可检测中性粒细胞的胞内杀菌能力;(2)为疾病的鉴别指标,如:全身性细菌感染时NBT阳性率明显升高,而病毒感染时,NBT阳性率反而下降。
3、小鼠肾脏中性粒细胞计数
观察培养后的细胞和细菌混合物,统计中性粒细胞内吞细菌的数量。通过统计吞噬细菌的数量,来反映中性粒细胞对细菌的吞噬能力。
以猪蛔虫受精卵实验感染小鼠,感染鼠的淋巴细胞和单核细胞数与对照无显著差异,中性粒细胞于感染后2天升高,至17天降低,而后又逐渐升高至对照组水平(Pramanik等,1996)。
免疫学研究:小鼠脾细胞可以用于免疫细胞的分离、培养、染色、检测等,以研究免疫细胞的生物学特性,如免疫应答、细胞因子分泌、免疫记忆等等。
通过脾细胞提取和计数实验,可以评估免疫细胞的数量和分布,并进一步研究免疫细胞的功能、亚群表型、细胞因子产生等,以深入理解免疫反应和免疫相关疾病的发生机制。
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