细胞核分离与纯化-细胞核分离纯化受哪些因素影响
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于细胞核分离与纯化的问题,于是小编就整理了3个相关介绍细胞核分离与纯化的解答,让我们一起看看吧。
1、如何分离细胞核与线粒体
细胞核和线粒体分离的时候正常来说用到的方法都是差速离心法,还有要通过吸水胀破的形式才会让细胞中的这些物质流出来。
细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到:(一)、差速离心 在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器。
运用差速离心法分离细胞器,细胞器沉降由上到下的顺序依次为:核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。
离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体,以及各种大分子基本手段。一般认为,转速为10~25Kr/min 的离心机称为高速离心机;转速超过25Kr/min,离心力大于89Kg者称为超速离心机。
2、细胞核纯化过程中,设定一定的离心速度有何意
在细胞核纯化过程中,设定一定的离心速度是为了利用离心力的作用将细胞核从其他细胞组分中分离出来。
差速离心差速离心(differential centrifugation)是指在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器(图1)。
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯,蔗糖和多聚蔗糖。
在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,随着转速增高,最先离心下来的是细胞核,然后是叶绿体,再下来是线粒体,而高尔基体应该是需要离心力最高的组分,就是最后离心下来的,因为上述组分中高尔基体比重最小。
结果应该是有蛋白质,DNA,脂类物质。涂片的不同应该是细胞核的有无,染色后的分布。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞,更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
3、描述细胞核的分离过程和鉴定结果?
细胞松弛素主要是破坏细胞骨架结构,细胞松弛素特异性的结合到微丝上,阻断微丝的组装。使得微丝去组装的速度大于组装速度,从而使微丝解体。有利于细胞核分离。
眼虫营分裂生殖时,核进行有丝分裂,分裂过程中核膜并不消失,随着细胞核中部收缩分离成两个子核,然后细胞由前向后纵裂为二(纵二分裂),其中一个带有原来的一根鞭毛,另一个又长出一根新鞭毛,从而形成两个眼虫。
将①、②、③涂片用l%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。结果 分别于高倍镜下观察三张涂片,描述镜下所见。
单个核细胞分离实验报告的写作应按照以下步骤进行:实验目的:明确实验的意义和作用。实验原理:阐述实验的依据和方法。实验步骤:详细记录实验过程。
前期; 是细胞分裂的开始。细胞外形一般变圆,中心体的中心粒分离,并向细胞的两极移动。四周出现发射状细丝。核膨大、脱氧核糖酸增多,核染色加深,不规则的染色质形成丝状染色体,并缩短变粗。
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