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1. 牛血清白蛋白的提取和鉴定方法(设计性实验报告)
2. 胎牛血清如何采取?
3. 请问细胞培养中胎牛血清过滤的详细步骤,
4. 胎牛血清是怎么生产的?

1、牛血清白蛋白的提取和鉴定方法(设计性实验报告)

加双缩脲试剂or茚三酮，RNA不是蛋白质，可筛除 或者加苔黑酚，RNA与苔黑酚反应呈蓝绿色 RNA与剩下两种蛋白质混合后，适宜温度，适宜PH反应后，加入苔黑酚（RNAase可降解RNA），无蓝绿色反应的那个为牛血清白蛋白。

%的牛血清白蛋白（BSA）配置方法如下：称取1克BSA，加入到10毫升的PBS缓冲液中。混合均匀，并在4℃下放置至少一小时，直到BSA彻底溶解。使用0.22微米滤器过滤溶液，以去除任何参杂的微生物或杂质。

标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。（二）、器材：722S型分光光度计使用及原理（）。移液管使用（）。

牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的套用，例如在western blot中作为Blocking agent；在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。

特别是用单抗腹水直接包被，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。BSA溶液配制方法 牛血清白蛋白就是我们常说的BSA。

2、胎牛血清如何采取?

胎牛血清的提取需要在合适的时间内进行，一般在胎牛出生后20分钟内采集血液，以保证血清的质量。采集后，将血液离心分离血浆，再进行多次过滤、灭菌等处理，最终得到FBS。

胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

吸取相应的胎牛血清和基础培养基的体积，混合均匀。 加入适量的抗生素，混合均匀。 灭菌处理，即可得到所需的10%胎牛血清完全培养基。

%（最常见为10%）。具体到不同试验，应依据文献报导，或细胞类型或基础培养基的成分来确定最佳浓度。胎牛血清应在-20℃储存，运输应干冰冷链运输，避免反复冻融，确保血清中因子活性不受影响，保证血清优良品质。

3、请问细胞培养中胎牛血清过滤的详细步骤,

在超净工作台中操作。配好调PH值。0.22uM滤膜过滤除菌。用移液管向胎牛血清中加入培养液，稀释十倍。

在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。

盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。

PBS：用购自中山公司的PBS粉剂，每袋加ddH2O定容至1000ml，调pH2，高压灭菌消毒。

实验步骤：消化细胞，制备无血清细胞悬浮液，计数，加入细胞悬液100ul，接种细胞105/孔。24孔板（下室）加入600ul含10%胎牛血清培养基，将小室置于24孔板中，上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。

4、胎牛血清是怎么生产的?

血液收集后，放在低温条件下凝集，经过离心去掉凝集物而获得血清。胎牛血清的获得量取决于胎儿的大小和年龄。采血的胎儿至少3个月，否则会因心脏太小而不便于操作。

胎牛血清的来源和制备 FBS是从胎牛的心脏或脐血中提取的血清，经过多次离心、过滤、灭菌等处理后得到。胎牛血清的提取需要在合适的时间内进行，一般在胎牛出生后20分钟内采集血液，以保证血清的质量。

来源不同：（1）小牛血清取自出生10－30天的小牛，出生三月龄小牛动脉采血分离血清。（2）胎牛血清是在屠宰怀孕母牛的时候，通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清。品质不同：（1）小牛血清品质不如胎牛血清。

%胎牛血清需要按照一定的比例进行配制，其中剩余的90%主要是基础培养基。具体配制步骤如下： 准备好基础培养基、胎牛血清和抗生素。

来源和用途不同。来源不同：胎牛血清是从胎牛体内获得的，而小鼠血清则来自小鼠体内。用途不同：胎牛血清用于细胞培养和实验室技术中，而小鼠血清则用于小鼠模型和研究。

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