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1. 小鼠外周血淋巴细胞分离实验报告
2. 密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理
3. 细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?
4. 免疫细胞分类及分离方法
5. 检测t,b淋巴细胞功能的实验主要有哪些

1、小鼠外周血淋巴细胞分离实验报告

本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞（mononuclear cell）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。

小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环驻如脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各类免疫细胞。免疫细胞的分离：采用红细胞裂解法，是根据细胞对渗透压变化的敏感度。

这是个简单实验，得到细胞量很大，能见到明显的淡红色，基本不会出现问题。观察不到细胞可能是液体加的多，离心弃上清即可。保证用的液体是缓冲液，Hanks液和PBS都可以。氯化钠会胀破细胞。别的我也想不到了。

　中性粒细胞的分离　 新鲜的外周血或骨髓，用肝素抗凝，经淋巴细胞分离液分离，去除淋巴细胞和单个核细胞，用右旋糖酐（dextran，分子量=7～11 万） 沉降和低渗法去除红细胞，得到纯净的中性粒细胞。

密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F／H）分层液。

2、密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理

密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F／H）分层液。

密度梯度离心法原理 密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度。密度梯度离心是将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。

密度梯度离心法：用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。

外周血中单个核细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同。

又称速率—区带离心，沉降系数较接近的物质分离的方法；原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。

3、细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?

无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

从PBMC中分离淋巴细胞的方法有：（1）贴壁粘附法；（2）吸附柱过滤法；（3）磁铁吸引法；（4）Percoll分离液法。

4、免疫细胞分类及分离方法

免疫细胞T 细胞及B 细胞的分离 将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。

包括粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞，以及T细胞和B细胞。粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞是参与机体非特异性免疫作用的主要细胞。

B-1细胞主要识别胸腺非依赖性抗原（TI抗原），即非蛋白质类抗原如脂类、多糖抗原等，这些抗原可直接激活B细胞，无需Th细胞的辅助。B-2细胞介导对胸腺依赖性抗原（TD抗原）即蛋白质抗原的免疫应且须有Th细胞的辅助。

收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。 用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。

方法 无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。

5、检测t,b淋巴细胞功能的实验主要有哪些

Hank；s 液 刀豆蛋白A（Concanvalin A， ConA），用RPMI1640 液配成1mg/ml，分装小瓶，冷冻保存 MTT 1mg/ml 5%碘酒、75%酒精 方法/步骤 小鼠脾细胞悬液的制备：取一个灭菌的平皿，加入5ml Hank；s液。

细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞（T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等）表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等，测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能，以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法凝集反应。

．T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最图导致细胞分裂。

【答案】：A T细胞表面具有PHA受体，能与PHA结合，促进体外培养的T细胞发生转化并增殖。这一过程称为淋巴细胞转化，常用于反映细胞免疫的功能。

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