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1. 如何分离纯化T B淋巴细胞
2. pbmc分离方法及原理是什么
3. 求人外周血B、T淋巴细胞的分离方法

1、如何分离纯化T B淋巴细胞

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

　在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。　取肝素抗凝静脉血与等量Hank；s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

根据T、B细胞膜表面标志及粘附能力等特性的不同，可将两者加以分离，常用的方法有E花结形成法、免疫吸附法和免疫磁性微珠分离法，近年来应用流式细胞仪可以分离出均质性的单一细胞类型或亚群。

\x0d\x0aT细胞及B细胞的分离\x0d\x0a将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMIl640培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T细胞。

【答案】：E 淋巴细胞分离的主要方法有黏附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分离液法。

2、pbmc分离方法及原理是什么

外周血单个核细胞（PBMC）是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞，而不是 Monocyte 单核细胞。

在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉皿与等量Hank‘s液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

PBMC的提取方法： 利用Ficoll将全血分层，之后进行梯度离心， 血液就会分离成一层血浆，然后是一层PBMCs和一层多形核细胞（polymorphonuclear ），如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，和底层红细胞。

目前国内外分离PBMC的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法（ficoll-hypaque density gradient centrifugation），用此方法分离PBMC纯度可达95％，淋巴细胞约占90％，其中T淋巴细胞占80％，B淋巴细胞占4～10％。

如何从浓缩的白细胞中高效的分离PBMC 。

3、求人外周血B、T淋巴细胞的分离方法

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

取新鲜抗凝血1ml，与生理盐水1：1 混匀后，小心加于2ml细胞分离液之液面上；以400g（约1500转/分，半径15cm水平转子）离心20分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层：为血浆层。

外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

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