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1. 有谁知道细胞培养的详细步骤
2. 原代细胞分离提取方法及注意事项
3. 原代细胞的分离培养
4. 什么是细胞剥离?
5. 原代细胞的提取方法包括哪些?

1、有谁知道细胞培养的详细步骤

细胞培养是在实验室中通过人工方法培育和繁殖细胞的过程，细胞培养的一般步骤包括：细胞株选择和准备、培养基配制和消毒、细胞接种、培养条件控制、细胞培养和维护、细胞检测和鉴定。

复苏 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

消化分离　消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。 培养　细胞悬液用计数板进行细胞计数。

2、原代细胞分离提取方法及注意事项

点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层（ monolayer ）。

原代细胞的提取方法包括：一般悬浮细胞，如血液细胞，就分离后，直接培养。培养组织中的细胞，就需要消化过后，进行培养，也有用组织块培养的。

两部灌流法的灌流液，ph值，氧气等因素，以及灌流时间很重要 如果血细胞去的非常干净，可以不用percoll分离 3，用低速离心（50g 2 min），死细胞在上层。 台盼蓝检测后基本95%以上活性。

注意事项 （1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般很难消除。（2）培养液：所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。

3、原代细胞的分离培养

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。

漂洗 将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入，中止消化反应，采用漂洗法洗 2-3 次后，加入完全培养基。

静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h （必要时72h）内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。

原代细胞的提取方法包括：一般悬浮细胞，如血液细胞，就分离后，直接培养。培养组织中的细胞，就需要消化过后，进行培养，也有用组织块培养的。

常用的适合做原代培养的材料包括： 鼠、人类的胚胎、脐带、脂肪、血液、骨髓、器官、组织和细胞等。原代培养是指从组织或细胞中直接分离出的细胞在适当的培养基中进行培养。

4、什么是细胞剥离?

从科学的角度上讲是 生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。什么是细胞剥离 细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。

细胞剥离是网上流行的细胞剥离美容术。基本原理：利用水动力软性剥离细胞 达到抗衰去皱纹的效果，从原理上看安全问题不大，生理盐水作为剥离的介质。

细胞剥离从科学的角度上讲，是生物细胞在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。

科学上指的是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。医美细胞剥离别称水剥离，软剥离。用注射生理盐水的方式，刺激皮下细胞再生。

5、原代细胞的提取方法包括哪些?

获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一，原代细胞分离的方法有很多种：悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等。

原代细胞是通过如酶法或机械法或生长法使细胞从人体和动物的母体器官、组织或液体中分离出来，并在受控环境条件下分离的细胞在体外或其他人体和动物体内生长，以上便是提取细胞来源 。

细胞的提取是实验的第一步，常用的提取方法包括化学法、机械法和酶解法等。各种方法的选择应根据实验的目的、材料的特性和所需的细胞类型确定。化学法是提取细胞的常用方法之一，主要利用生物学中的化学特性来分离或提取细胞。

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。

方法步骤： 1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min 2．溶解DNA： 3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢 4．过滤：取黏稠物 5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。

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