分离细胞组分内参,分离细胞组分内参和外参
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1、为了得到更纯的细胞组分通常采用的分离技术是什么
差速离心和密度梯度离心。细胞结构成分离心分离的方法主要有两类,分别是差速离心和密度梯度离心。离心技术,是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一,也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法。
细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到:(一)、差速离心(differential centrifugation)在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器。
用平板划线法进行纯种分离的原理是:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞,用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞,并让其成长为单菌落。优点是操作简单。
失生物活性。常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等。超声波破碎法:当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术。
2、细胞组分分离的三种沉降方法
细胞组分的分离方法:离心,包括差速离心、密度梯度离心、速度沉降、等密度沉降,流式细胞术分选,层析技术、电泳技术等。
离心法的原理是,不同种类的细胞,其大小、形态、密度、质量等物理性质不同,在离心力的作用下,它们具有不同的沉降速率,从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。
外周血中除红细胞外,还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等,通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种:自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。
差速离心法是交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法,此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。
3、说明对不同细胞组分进行分级分离所用方法的基本原理。
各种组分的沉降系数不同,所以用差数离心来分离。
离心法的原理是,不同种类的细胞,其大小、形态、密度、质量等物理性质不同,在离心力的作用下,它们具有不同的沉降速率,从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。
细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。
细胞内不同结构的比重、大小和形态都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种亚细胞组分分级分离出来。沉降速度:细胞核线粒体微粒体。
机械法:利用物理外力,如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法,将细胞分离开。优点:操作简单,不使用有毒和致癌物质。缺点:对于细胞脆弱的情况,会造成细胞损伤。
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