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流式细胞术分离B细胞-流式细胞术分离细胞的原理

流式细胞术分离B细胞-流式细胞术分离细胞的原理

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  1. 如何用流式分选出T,B淋巴细胞
  2. 流式细胞术查出原幼B淋巴细胞抗原是什么意思
  3. 将细胞分离的原理有哪些?各有什么特点
  4. 要从混合的T、B细胞中分离T细胞,最佳的方法是
  5. 说明对不同细胞组分进行分级分离所用方法的基本原理。

1、如何用流式分选出T,B淋巴细胞

一般都是先得到全血,然后染色,一般是CD45,CD3加CD20三种抗体。染色后裂解红细胞。T细胞是CD45和CD3双阳性的,B细胞是CD45和CD20双阳性。上机设置分选门后分选即可。

你说的这几种细胞都可以通过标记,然后再流式细胞仪上鉴别出。T细胞表面表达CD3,不表达CD19;B细胞相反,所以可以通过标记CD3和CD19将T细胞和B细胞区分开,即CD3 CD19-是T细胞,CD3-CD19 是B细胞。

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4 T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。

根据T、B细胞膜表面标志及粘附能力等特性的不同,可将两者加以分离,常用的方法有E花结形成法、免疫吸附法和免疫磁性微珠分离法,近年来应用流式细胞仪可以分离出均质性的单一细胞类型或亚群。

先在FSC, SSC散点图上划出淋巴细胞gate。然后在此gate基础上选取T细胞标志染色阳性的细胞群(一般是CD3)。在把CD34阳性的细胞根据CD4 和CD8染色情况形式为散点图,得到CD4 /CD8-, CD4-/CD8 , 以及双阳性的比率。

2、流式细胞术查出原幼B淋巴细胞抗原是什么意思

B细胞在未成熟以前,位于骨髓中,不进入外周血液。干细胞发育为成熟B细胞,要经历原幼,早幼再到成熟这几个阶段。每个阶段细胞表面所表达的抗原是不一样的。

CD19是B淋巴细胞表面抗原,是机体重要的免疫细胞,与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关,在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。

流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。

T细胞抗原受体:成熟T细胞表面具有特异性识别抗原并与之结合的分子结构,称为T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)。

流式细胞术原理:待测样品(如细胞、微球、精子或细菌等)被制成单细胞悬液,在一定压力下被鞘液包裹着形成单列的细胞进入流动室,并与激光束相交。

3、将细胞分离的原理有哪些?各有什么特点

结构特点:圆形、卵形、纺锥形或多形性的吞噬细胞,嗜碱性细胞质富含核糖体、线粒体、液泡等,细胞核具嗜伊红颗粒。

局部分泌:这是所有分泌性细胞的共有分泌方式。

浆细胞大多见于消化管和呼吸道固有膜的结缔组织内。细胞较小,圆形或卵圆形,核圆但偏于细胞一侧,染色质粗,沿核膜呈辐射状排列成车轮状。细胞质呈嗜碱性,染为蓝色。在靠近核处,有一着色浅的区域。

结构决定功能”是生物学的基本原理之一,细胞若具有某种结构,就应该具有该结构所对应的生理功能。若发现细胞具有某种功能,也可以反映出细胞应该具有哪些结构以及该结构的特点。

成熟B细胞接受抗原刺激后,在抗原提呈细胞和Th细胞的辅助下成为活化B细胞,进而分化为浆细胞,合成和分泌各类免疫球蛋白,同时表达浆细胞抗原-1等浆细胞特异性标志,而mIg、MHCⅡ类分子、CD1CDCD21等标记消失。

4、要从混合的T、B细胞中分离T细胞,最佳的方法是

流式细胞术(A对)是一种集光学、流体力学、电力学和计算机技术于一体,可对细胞进行多参数定量测定和综合分析的方法,可用来分离各种细胞。

流式细胞术是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型的细胞分析技术和分选技术。能精确的从混合的T、B细胞中分离T细胞,故首选A。

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。

正确答案:C 解析:单个核细胞的比重与红细胞、白细胞及血小板不同,可通过密度梯度离心进行分离 。T细胞表面有CD3分子,用CD3抗体包被免疫磁珠,T细胞与之结合,B细胞不能结合 。细胞经孵育再通过磁场便能分离 。

5、说明对不同细胞组分进行分级分离所用方法的基本原理。

各种组分的沉降系数不同,所以用差数离心来分离。

离心法的原理是,不同种类的细胞,其大小、形态、密度、质量等物理性质不同,在离心力的作用下,它们具有不同的沉降速率,从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。

细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。

细胞内不同结构的比重、大小和形态都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种亚细胞组分分级分离出来。沉降速度:细胞核线粒体微粒体。

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