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淋巴细胞分离方法及其优点-淋巴细胞分离方法及其优点是

淋巴细胞分离方法及其优点-淋巴细胞分离方法及其优点是

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  1. 怎么分离出人体血清里的淋巴细胞?
  2. 从PBMC中进一步分离T.B淋巴细胞可采用哪些方法
  3. 不加抗凝血淋巴细胞体外保存方法有哪些

1、怎么分离出人体血清里的淋巴细胞?

无菌抽取静脉血2ml,去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀,加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释,混匀。

方法:在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。取肝素抗凝静脉血与等量Hank;s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉血与等量Hank;s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

外周血中除红细胞外,还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等,通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种:自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

2、从PBMC中进一步分离T.B淋巴细胞可采用哪些方法

从PBMC中分离淋巴细胞的方法有:(1)贴壁粘附法;(2)吸附柱过滤法;(3)磁铁吸引法;(4)Percoll分离液法。

PBMC的提取方法: 利用Ficoll将全血分层,之后进行梯度离心, 血液就会分离成一层血浆,然后是一层PBMCs和一层多形核细胞(polymorphonuclear ),如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,和底层红细胞。

 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 取肝素抗凝静脉血与等量Hank;s液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。

PBMC的提取方法: 利用Ficoll将全血分层,之后进行梯度离心, 血液就会分离成一层血浆,然后是一层PBMCs和一层多形核细胞(polymorphonuclear ),如中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,和底层红细胞。

3、不加抗凝血淋巴细胞体外保存方法有哪些

【方法】静脉取血2ml,加入含肝素溶液(10~50u/m1血样本)的试管中,混匀,使血液抗 凝。用pH2 Hanks液将抗凝血稀释1倍。

应用物理或化学方法,除掉或抑制血液中的某些凝血因子,阻止血液凝固,称为抗凝。能够阻止血液凝固的化学试剂或物质,称为抗凝剂或抗凝物质。

若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。

需要看是什么标本,血离子标本放置过久会使钾离子升,分离胶管贮存的血标本再离心致钾离子增高。严密控制标本误差因素。

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