大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于白细胞分离冻存方法的问题，于是小编就整理了5个相关介绍白细胞分离冻存方法的解答，让我们一起看看吧。

1. 白细胞在实验室冷冻能保存多久
2. 全血中提取白细胞的方法
3. 如何将全血中的红细胞,白细胞,血小板分离?
4. 外周血细胞分离的方法有哪些?分别如何操作
5. 要做PCR的血液标本如何保存

1、白细胞在实验室冷冻能保存多久

细胞上清可以常温放1-2天。理论上可永久储存。研究表明，细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，只要保存得当，理论上储存时间是无限的。

其他成分保存期较短，如白细胞只能保存5天，其中粒细胞破坏最快，24小时即丧失功能；血小板在4℃保存1天即明显破坏，48小时存活率为40％，3天后已无治疗价值；因子Ⅷ24小时活性下降50％；因子V保存3～5天可损失一半。

但2h后粒细胞形态即有变化。故需做镜检下分类者，应及早制备血涂片。在4℃可延长血液贮存期，WBC、RBC、PLT稳定48h，白细胞分类可稳定8~10h。当血液标本不能及时转运和检验时，应在较低温度下保存。

温度在20℃，有效期在48小时。根据相关资料显示保存白细胞浓缩悬液实质上就是去除了绝大部分白细胞的红细胞悬液成分，而白细胞浓缩悬液需要20℃的环境进行保存，有效期为48个小时。

2、全血中提取白细胞的方法

新鲜全血，红细胞裂解液（1：1），颠倒混匀数次，静置5min。10000g，4度，10min。此时可见白细胞沉淀和上层亮红色的液体。加入TRIzol，（106－107细胞加500ul），反复抽吸，直至有大量泡沫产生（细胞裂解的标志之一）。

你可以把血液放在试管上，加入抗凝剂，放置24小时后，你就会发现血液发生了分层现象。试管上层的是血浆，下层是血细胞（包括血小板和红细胞）；中间隔了层白细胞。

直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。

白细胞计数，全血用稀酸溶液稀释后，冲入计数板，计数，再换算求出每升血液中的白细胞总数。记得要扣除有核红细胞的影响。

外周血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法： 试验步骤：取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。

3、如何将全血中的红细胞,白细胞,血小板分离?

离心分离：从供血者身体中采集整体血液，通过离心装置，将采集到的血液高速旋转，使得红细胞、白细胞和血小板等成分分层。重力使得红细胞沉淀于底部形成红细胞层，上层则是血浆。

对于血小板与血浆的分离，转速通常较低，一般在1200至1500g之间，离心时间也更长，一般为20至30分钟。

抽取血液，首先，医生会从患者的体内抽取一定量的血液，通常是从手臂的静脉中提取。然后，离心分离，抽取的血液会被放入离心机中进行离心分离。

血液离心后分层分别为血浆层、白细胞和血小板层、红细胞层。根据百度健康查询得知，血液离心通常是在血标本中加入枸橼酸钠等抗凝剂，然后再放入离心机，利用高转速和血液成分不同密度，达到血液分层的目的。

离心法：利用离心力把血液里不同密度的成分分开。

4、外周血细胞分离的方法有哪些?分别如何操作

目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。方法：　在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。

分离外周血单个核细胞的方法是：聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法。利用介于两者比重之间的溶液（称为分层液）作为密度梯度离心，就可得到单个核细胞。外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。

取血 2用红细胞裂解液裂解红细胞，或者用FICOLL分离含有淋巴细胞的白膜层 3吸取白膜层用CD3，CD4，CD8的抗体染色，用流式细胞仪的分选功能选出目的细胞。

【答案】：B 外周血单个核细胞的分离方法及由上到下的细胞分层是单次密度梯度离心分离法（Ficoll液），稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层、红细胞层。

5、要做PCR的血液标本如何保存

PCR样本可分2种，DNA样本和RNA样本。

设立专门冰箱，专门人员，单独保存标本。（4）标本保存期间应避免反复冻融。（5）检测完标本，应置于-70℃以下保存14天，并做好登记。

温度在零下会使红细胞破裂；血液保存液有好几种，不同的保存液保存时间不同。有些稀有血型血液会制备成冰冻红细胞，需要加入甘油，置于零下70摄氏度，可以保存一年。使用前需要制备成冰冻解冻去甘油红细胞。

最好用新鲜血液提取，不具备条件时先抗凝再冷冻保存。抗凝剂最好用肝素，因为EDTA可能会对后续的PCR有影响，会螯合PCR反应中的Mg2 ，亦可根据实验要求选择适当的抗凝剂。冷冻血液的保存：先液氮速冻，再置于- 80℃保存。

到此，以上就是小编对于白细胞分离冻存方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于白细胞分离冻存方法的5点解答对大家有用。