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1. 检测巨噬细胞的功能还有什么方法?
2. 如何获取机体中的吞噬细胞
3. 外周血单核、巨噬细胞的分离和培养方法
4. percoll淋巴细胞分离液可以分离巨噬细胞吗

1、检测巨噬细胞的功能还有什么方法?

硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。

炭粒廓清试验就是利用这一原理，通过给静脉注射炭粒悬液，以血中炭粒被清除的速度来判断巨噬细胞的功能。B项，皮肤窗法是一种观察炎症进程的试验。C项，化学发光测定法在污染物测定、酶分析和免疫测定法等方面中应用广泛。

还有下面两个方法也可以参考下：巨噬细胞：鸡血细胞吞噬实验。小鼠腹腔注射1％鸡血0.5~1ml，活动30～60min。小鼠断颈处死后，注射Hank’s液3～4ml吹匀，取腹水细胞涂片。直接观察或干燥后瑞氏染料染色，镜检。

取材 血液 6 吞噬鸡红细胞功能试验的原理 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有强大的吞噬功能，因此，将一定量鸡红细胞与巨噬细胞悬液共育时，即可见吞噬现象发生。

细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞（T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等）表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等，测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能，以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法凝集反应。

2、如何获取机体中的吞噬细胞

吞噬细胞是由人体自身产生的，它的作用非常的广泛，可以杀死一些有害的细胞。

巨噬细胞具有很强的吞噬能力，还是一类主要的抗原递呈细胞，在特异性免疫应答的诱导与调节中起关键作用。中性粒细胞是一类小吞噬细胞，具有非特异性免疫防御作用并参与机体的免疫应答、炎症损伤等。

人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。

吞噬细胞在这些希望的细胞附近可能几分钟就可以处理干净了。而吞噬细胞内具有消化酶，可以把死亡的细胞全部分解，然后将剩余的废物排出体外就可以。

培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。

3、外周血单核、巨噬细胞的分离和培养方法

巨噬细胞培养具有贴壁生长的特性，将上述PBMC至于细胞培养瓶中培养，淋巴细胞悬浮于培养液中，可以祛除，贴壁生长的就是单核巨噬细胞了。改变培养条件，就可以将其从贴壁上悬浮起来，稀释成适当浓度即可。

外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

PBMC分离方法的原理是基于血液成分不同的密度，通过在双重密度梯度中离心，利用较低密度部分的小分子浮力将红细胞沉淀，从而获得纯化的单克隆T细胞。

THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

4、percoll淋巴细胞分离液可以分离巨噬细胞吗

红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

m1 加入上述的平皿内，4℃放置2 小时，用PBS 轻轻洗净末粘附的细胞，然后用毛细管加入10m1 PBS 吹打。收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

单核/巨噬细胞具有变形运动，对玻璃和塑料表面有很强的黏附能力，借此可将单核/巨噬细胞与淋巴细胞彼此分离。巨噬细胞分为定居的巨噬细胞和游走的巨噬细胞两大类。

用预冷的适量RPMI-1640培养液悬浮细胞，台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力。家兔肺泡巨噬细胞的分离和纯化巨噬细胞的分离和纯化取2～3公斤重的家兔，耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml（含130mg）戊巴比妥麻醉动物。

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