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1. 细胞破碎的意义和定义
2. 如何分离细胞核与线粒体
3. 说明对不同细胞组分进行分级分离所用方法的基本原理。
4. 细胞内蛋白质大分子怎么分离纯化

1、细胞破碎的意义和定义

血细胞包括：红细胞、白细胞、血小板红细胞作用：运送氧。白细胞作用：当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板作用：止血。

机械法：主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。常用的细胞破碎方法有反复冻融法、超声破碎法、酶处理法、自溶法和表面活性剂处理法。

其破碎机理：可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。行细胞破碎。其破碎机理：可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。

纯化有活性的转化因子。然后鉴定转化因子的性质，或者至少获得足够的描述性信息将转化因子归于某类已知化学物质之列。艾弗里和他的同事将加热至死的S型细菌破碎后，设法去除绝大部分糖类、蛋白质和脂质，制成细胞提取物。

化验结果临床意义 增多：弥散性血管内凝血、巨幼红细胞性贫血、溶血尿毒症综合征、溶血性贫血、心源性溶血性贫血、恶性肿瘤、严重烧伤、脾切除术后。

2、如何分离细胞核与线粒体

细胞核和线粒体分离的时候正常来说用到的方法都是差速离心法，还有要通过吸水胀破的形式才会让细胞中的这些物质流出来。

细胞核沉降系数大，首先是低速离心，分离出细胞核；线粒体沉降系数小，然后是高速离心，分离出线粒体。

细胞器的分离主要用到的是离心技术。主要用到：（一）、差速离心 在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。

运用差速离心法分离细胞器，细胞器沉降由上到下的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。

离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min 的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。

3、说明对不同细胞组分进行分级分离所用方法的基本原理。

各种组分的沉降系数不同，所以用差数离心来分离。

离心法的原理是，不同种类的细胞，其大小、形态、密度、质量等物理性质不同，在离心力的作用下，它们具有不同的沉降速率，从而得以分离。亲和法分离细胞是利用一些细胞对玻璃或塑料具有较大的粘附力的特点。

细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。

细胞内不同结构的比重、大小和形态都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种亚细胞组分分级分离出来。沉降速度：细胞核线粒体微粒体。

4、细胞内蛋白质大分子怎么分离纯化

分离纯化的方法：1．分子大小；溶解度；电荷；吸附性质；对配体分子的生物亲和力等。（一）根据分子大小不同的纯化方法 透析 利用蛋白质分子不能通过半透膜，使蛋白质和其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。

根据分子大小不同进行分离纯化 蛋白质是一种大分子物质，并且不同蛋白质的分子大小不同，因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开，并使蛋白质混合物也得到分离。

盐析法：利用不同蛋白质对盐浓度的敏感性差异，通过逐渐加入盐类使蛋白质沉淀析出，再通过离心去除沉淀物。盐析法：根据蛋白质分子大小的差异，利用凝胶过滤介质的孔隙大小将蛋白质分子从溶液中分离出来。

ph小于pi时蛋白质带正电，ph大于pi时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差异来实现分离的。

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