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1. 细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?
2. 免疫细胞分类及分离方法
3. 怎样从肠道淋巴结中分离淋巴细胞?谢谢!
4. 求人外周血B、T淋巴细胞的分离方法

1、细胞生物学:如何从血液中分离b淋巴细胞?

无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

从PBMC中分离淋巴细胞的方法有：（1）贴壁粘附法；（2）吸附柱过滤法；（3）磁铁吸引法；（4）Percoll分离液法。

第一层：为血浆层。第二层：为环状乳白色淋巴细胞层。第三层：为透明分离液层。第四层：为红细胞层。收集第二层细胞放入含生理盐水4-5ml的试管中，充分混匀后，以400g（约1500转/分）离心20分钟。

2、免疫细胞分类及分离方法

免疫细胞T 细胞及B 细胞的分离 将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B 细胞粘附于尼龙棉上，T细胞则不粘附，先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱，流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。

包括粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞，以及T细胞和B细胞。粒细胞、单核巨噬细胞、NK细胞、γδT细胞是参与机体非特异性免疫作用的主要细胞。

B-1细胞主要识别胸腺非依赖性抗原（TI抗原），即非蛋白质类抗原如脂类、多糖抗原等，这些抗原可直接激活B细胞，无需Th细胞的辅助。B-2细胞介导对胸腺依赖性抗原（TD抗原）即蛋白质抗原的免疫应且须有Th细胞的辅助。

收集的脱落细胞经洗涤后悬浮在RPMI l640 培基中备用。CD4 细胞亦可用此法分离。 用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。

方法 无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。

3、怎样从肠道淋巴结中分离淋巴细胞?谢谢!

淋巴细胞分离的主要方法有黏附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分离液法。

从PBMC中分离淋巴细胞的方法有：（1）贴壁粘附法；（2）吸附柱过滤法；（3）磁铁吸引法；（4）Percoll分离液法。

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

小鼠的没有做过，可以参考人的，肠壁中固有层有许多的淋巴细胞，所谓固有层其实就是位于肠腔上皮下方，这里从小肠开始至结肠，开始没有淋巴小结，然后逐渐增多，如果有2个以上的淋巴小结在一起就叫做集合淋巴小结。

它们无须抗原刺激即可不断增殖淋巴细胞，成熟后将其转送至周围淋巴器官。后者包括脾、淋巴结等。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。

4、求人外周血B、T淋巴细胞的分离方法

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物，然后用CD4 T细胞的单抗，免疫磁珠法分离；或者利用流式细胞仪进行分选。

PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。

取新鲜抗凝血1ml，与生理盐水1：1 混匀后，小心加于2ml细胞分离液之液面上；以400g（约1500转/分，半径15cm水平转子）离心20分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层：为血浆层。

外周血中除红细胞外，还有粒细胞、单核细胞和淋巴细胞及血小板等，通常是分离这些血细胞的重要来源。其分离方法有四种：自然沉降法、差异沉降法、氯化铵分 离法、Ficoll分离法。

差速离心法是无法分离B细胞的。可以采用抗体标记来分离。根据抗体所标记的物质不同，一般有两种方法：标记了磁珠，颗粒通过吸附。标记了荧光素，则可以通过流式分选。

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